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《泥蚶亞鐵螯合酶（ferrochelatase）基因的克隆和表達(dá)分析【開題報告】》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、畢業(yè)論文開題報告生物工程泥蚶亞鐵螯合酶（ferrochelatase）基因的克隆和表達(dá)分析一、課題研究意義及國內(nèi)外研究現(xiàn)狀研究意義：亞鐵螯合酶在血紅蛋白中血紅素的合成中起著重要的作用，是一種關(guān)鍵性酶。泥蚶的載氧蛋白為血紅蛋白，這與其他大多數(shù)貝類載氧蛋白為血藍(lán)蛋白不同。而造成這種差異現(xiàn)象，目前還沒有人進(jìn)行研究。因此，研究泥蚶亞鐵螯合酶對于研究泥蚶血紅蛋白功能與其“特殊性”有著重要的指導(dǎo)性意義。研究現(xiàn)狀：紅齒癥，是一種常染色體隱性遺傳缺陷病。攜帶者血紅素及卟啉代謝紊亂，嚴(yán)重時會導(dǎo)致個體死亡。該病主要由于紅血素生物合成途徑最后一步中的亞鐵螯合酶(Ferroch
2、elatase，F(xiàn)C)活性降低引起，該酶是紅血素合成途徑中的關(guān)鍵酶，催化二價亞鐵嵌入原卟啉合成紅色素，當(dāng)FC活性不足時會造成血紅素合成降低和卟啉及其前體過度增加，從而引起貧血、皮膚光過敏、骨質(zhì)脆性和肝臟損傷等。目前，對人的FC基因研究較多，現(xiàn)已在人編碼區(qū)和結(jié)合區(qū)發(fā)現(xiàn)90多個突變，但大多為無效等位基因。DiPierroEn等在研究人FC基因時發(fā)現(xiàn)FC基因啟動子下游250bp位置發(fā)生(G—C)突變，從而影響特異性β1糖蛋白結(jié)合，造成酶活性顯著降低，引起紅細(xì)胞生成性原卟啉癥(EPP)。Jenkins等在牛的FC基因上發(fā)現(xiàn)一個終止密碼子突變?yōu)榱涟彼幔撏蛔儗?dǎo)致編
3、碼蛋白增加了27個氨基酸，從而使酶活性降低，確定該突變?yōu)橹虏⊥蛔儭Ｄ囹雷鳛閾碛醒t蛋白的“特殊”一類貝類生物，研究泥蚶血紅蛋白必然牽涉到亞鐵螯合酶的研究，然而，其亞鐵螯合酶基因相關(guān)研究未見報道，因此研究亞鐵螯合酶基因的特征及相關(guān)功能，對研究血紅蛋白有著重要的意義。二、課題研究的主要內(nèi)容、預(yù)期目標(biāo)和研究方案研究內(nèi)容：克隆亞鐵螯合酶基因全長；分析基因序列；進(jìn)行亞鐵螯合酶基因組織表達(dá)特異性分析預(yù)期目標(biāo)：獲得泥蚶亞鐵螯合酶基因的cDNA全長克隆產(chǎn)物；分析序列特征；獲得基因組織表達(dá)數(shù)據(jù)，分析基因表達(dá)特異性。研究方案：1.根據(jù)已有的EST序列，然后用3′,5′RAC
4、E的方法擴(kuò)增基因亞鐵螯合酶的cDNA全長；2.利用NCBIblast數(shù)據(jù)庫、DNAman以及mega等相應(yīng)生物分析軟件，分析基因序列。3.利用熒光定量qRT-PCR法檢驗(yàn)血液、肝胰腺、斧足、外套膜、閉殼肌、鰓等等組織中的表達(dá)規(guī)律；三、課題進(jìn)度計(jì)劃2010.8.30—2010.10.30：完成畢業(yè)論文選題，接受任務(wù)書，系統(tǒng)的查找相關(guān)的基因克隆和表達(dá)分析的資料和文獻(xiàn)，制訂實(shí)驗(yàn)的計(jì)劃和方案2010.11.1—2011.1.20：申請實(shí)驗(yàn)教室、實(shí)驗(yàn)用品和相關(guān)試劑開始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄關(guān)鍵性的實(shí)驗(yàn)步驟和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)；2011.1.21—2011.2.25：整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和完
5、成論文初稿。參考文獻(xiàn)[1]彭禮瓊，蔣明，郭志平等。青花菜查爾酮合成酶基因BoCHS的克隆，表達(dá)及序列分析。湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)雜志第49卷第8期[2]隋慧，楊金生。RHDVCD株VP60主要抗原表位基因的克隆與序列分析。中國動物檢疫雜志第29卷第8期[3]FRIEDMAN，BAKER．Theevolutionofresistancegenesinmulti—proteinplantresistancesystems[J]．CurrOpininGen，2007，17：493—499．[4]AGN0LA，BOURY，MONOT，eta1．Evidencethatal
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