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1、374現(xiàn)代免疫學(xué)!2011年第31卷第5期一株鼠抗人TLT2單克隆抗體的研制及其生物學(xué)特性的鑒定徐俊馳,傅豐慶,高菲,周斌,胡玉敏,張學(xué)光(蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部醫(yī)學(xué)生物技術(shù)研究所,蘇州市感染免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,蘇州215007)摘要:為了制備鼠抗人TLT2單克隆抗體(mAb)并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行初步的研究。以TLT2基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株免疫BALB/c小鼠,采用雜交瘤技術(shù)制備鼠抗人TLT2mAb,收集腹水,并用ProteinG親和層析法純化。以流式細(xì)胞術(shù)、IP和Westernblot等方法鑒定該單抗的特異性。并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)、CCK8和E
2、LISA等方法對(duì)單抗的生物學(xué)特性進(jìn)行了初步分析。結(jié)果:獲得一株持續(xù)穩(wěn)定分泌鼠抗人TLT2mAb的雜交瘤細(xì)胞株,命名為8C10。雜交瘤細(xì)胞分泌的mAb的Ig亞類(型)為IgG1()。IP和Westernblot分析證明,8C10能特異性識(shí)別人TLT2分子。經(jīng)8C10熒光染色后流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果表明:TLT2在T細(xì)胞表面呈弱陽(yáng)性表達(dá),在單核細(xì)胞和B細(xì)胞表面呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,該mAb對(duì)T細(xì)胞的增殖有抑制作用。提示,成功獲得了一株特異性鼠抗人TLT2mAb,該mAb對(duì)T細(xì)胞體外增殖及其細(xì)胞因子IFN、IL2、和I
3、L10的分泌均有明顯的抑制作用。關(guān)鍵詞:TLT2;單克隆抗體;雜交瘤;真核表達(dá)質(zhì)粒中圖分類號(hào):R392.12文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):10012478(2011)05037405[10]固有免疫應(yīng)答是機(jī)體抗感染的第一道防線,在化以及細(xì)胞因子的分泌。關(guān)于人TLT2的生物宿主受到感染的早期階段起到至關(guān)重要的作用。固學(xué)特性和功能至今尚缺乏了解。鑒此,研制功能性有免疫應(yīng)答主要是通過(guò)中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)鼠抗人TLT2單克隆抗體具有重要的理論與實(shí)際胞、NK細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞的協(xié)調(diào)作用來(lái)實(shí)現(xiàn)應(yīng)用價(jià)值。本研究成功
4、研制了一株特異性鼠抗人[1]的。在這些免疫細(xì)胞上可表達(dá)多種模式識(shí)別受TLT2功能性單克隆抗體,并對(duì)其生物學(xué)特征進(jìn)[2,3]體,如:Toll蛋白樣受體(TLR)、G蛋白偶聯(lián)行初步的分析。受體、甘露糖受體、Fc受體等這些受體識(shí)別并結(jié)1材料與方法合病原體,從而介導(dǎo)效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮免疫作用。除上述受體外,效應(yīng)細(xì)胞還能表達(dá)另外一些模式識(shí)別受1.1實(shí)驗(yàn)材料與細(xì)胞株L929/TLT2、L929/體家族,此類受體往往同時(shí)包括激活受體和抑制受[11]BTLA、L929/CD28和L929/mock基因轉(zhuǎn)染細(xì)[4]體。髓樣細(xì)胞表達(dá)的激發(fā)受體(tri
5、ggeringrecep胞株由本科室構(gòu)建并保種;RPMI1640和DMEMtorsexpressedbymyeloidcells,TREM)就是這種培養(yǎng)基購(gòu)于美國(guó)GIBCO公司;小牛血清購(gòu)自美國(guó)類型的受體。Hyclone公司;Pristane、HAT和HT購(gòu)自美國(guó)TLT2是最新發(fā)現(xiàn)的TREM家族成員。全長(zhǎng)Sigma公司;PEG1500購(gòu)自Roche公司產(chǎn)品;TLT2基因包含五個(gè)外顯子,由321個(gè)氨基酸組ProteinG親和層析柱購(gòu)自瑞典Pharmacia公司;激成(~35kD)。TLT2分子含有較長(zhǎng)的胞內(nèi)段并且發(fā)型鼠抗人CD3單
6、克隆抗體購(gòu)自法國(guó)Immunotech[5~8]其可以獨(dú)立的介導(dǎo)一條信號(hào)通路。在小鼠的研公司;流式細(xì)胞儀為美國(guó)BeckmanCoulter公司產(chǎn)究中發(fā)現(xiàn),TLT2分子主要表達(dá)于B細(xì)胞表面,品;鼠IgG亞型快速定性試紙條為法國(guó)Argen公++在激發(fā)后的CD4和CD8T細(xì)胞表面也有一定的[9]司;羊抗人TLT2(克隆號(hào):MIH4)多抗購(gòu)自美國(guó)表達(dá),并且鼠TLT2分子可以誘導(dǎo)T細(xì)胞的活R&D公司。IL10、IL2和IFNELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自Biosource公司。收稿日期:20110317;修回日期:20110615
7、1.2人TLT2基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞的構(gòu)建據(jù)已知的人基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30901313)TLT2cDNA序列,結(jié)合生物信息學(xué)分析的結(jié)果,作者簡(jiǎn)介:徐俊馳(1985),男,在讀碩士生,主要從事分子免疫學(xué)的研究。設(shè)計(jì)了上下游2條核苷酸引物(上游引物為:5通訊作者:張學(xué)光(Email:xueguangzh@yahoo.com.cn)CCTCTCGAGATGGCCCCAGCCTTCCTG徐俊馳,等.一株鼠抗人TLT2單克隆抗體的研制及其生物學(xué)特性的鑒定375C3;下游引物為5TCAGATCAAGTAGAC
8、表達(dá)情況。TTCCACATAGG3),內(nèi)含EcoRI和XhoI酶1.7單克隆抗體對(duì)T細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用經(jīng)Fi切位點(diǎn)。以本所已構(gòu)建的PMD19T/TLT2質(zhì)粒coll分離健康供血者的PBMC。用
