混合酶消化法大鼠顱蓋骨細(xì)胞原代培養(yǎng)及鑒定

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1、混合酶消化法大鼠顱蓋骨細(xì)胞原代培養(yǎng)及鑒定基金項(xiàng)目:福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號:2908)作者單位:350004福建醫(yī)科大學(xué)省立臨床學(xué)院(孫玲);福建省立醫(yī)院(侯建明)通訊作者:侯建明【摘要】目的通過不斷的摸索,尋找一種獲得細(xì)胞數(shù)量較多且純的原代成骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法,為下一步實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。方法取出生24h內(nèi)的SD大鼠脫臼處死,取出顱蓋骨,剪成1mmx1mmxlmm大小的組織片;采用胰酶和I型膠原酶混合酶消化法分離獲得原代成骨細(xì)胞;采用“差速貼壁法”進(jìn)行純化。通過對細(xì)胞形態(tài)學(xué)的鏡下觀察,堿性磷酸酶染色及I型膠原免疫組化法等對細(xì)胞進(jìn)行鑒定。結(jié)果鏡下觀察所獲得的細(xì)胞具

2、有成骨細(xì)胞的典型特征,細(xì)胞多為單核,呈三角形、多邊形、長梭形等形態(tài),并伸有粗大偽足;堿性磷酸酶染色及I型膠原免疫組化染色呈陽性。結(jié)論采用混合酶消化法可獲得數(shù)量較多且活性較好的細(xì)胞,再采用“差速貼壁法”可以去除成纖維細(xì)胞等雜質(zhì)細(xì)胞,獲得純度較高的成骨細(xì)胞。【關(guān)鍵詞】成骨細(xì)胞;原代培養(yǎng);大鼠;混合酶消化法PrimarycultureandidentificationofratscranialcoverosteocytesSUNLing,HOUJian-ming.FujianMedicalUniersity,Fuzhou350004,China[Abstract]Objec

3、tiveThroughcontinuousexploration,wewanttosearchforamethodofcultivatingtheoriginalgenerationosteoblastsinvitrowhichcangetsalargerquantityandpuretheoriginalgenerationofosteoblasts,toprepareforthenextexperimentresearch.Methods24hoursoldofSDratswereexecutedbydislocating.Thecranialcoverbones

4、ofratswereremovingandcutingintotheblocksof1mmx1mmx1mmsize?Thecrinialbonesweredigestingbymixedenzymewhichcontainsenzymeandltypecollagenase.Theosteoblastwerepurifiedbyselectiveplatingtechnique.Theosteoblastswereidentifiedthroughmorphlogyobservation,alkalinephosphatasedyeing,collagenlimmun

5、ohistochemicalstaining.ResultsTheculturedcellshavethetypicalfeaturesofosteoblast.Thecellsaretriangle,polygonal,Iongspindleshape,etc.andmostlyaremononuclearcells,havelargepseudopodia?Alkalinephosphatasedyeingcollagenlimmunohistochemicalstainingarebothpositive.ConclusionAlargequantityanda

6、ctivityofthegoodcellswereobtainedbymixedenzymedigestionmethod?Highpurityosteoblastswereobtainedbyselectiveplatingtechniquethatcanremoveimpuritiessuchasfibroblastcells.[Keywords]Osteoblast;Primaryculture;Rat;Mixedenzymedigestion隨著中國人口老齡化的到來,骨質(zhì)疏松的發(fā)病率呈上升趨勢,骨質(zhì)疏松的發(fā)病機(jī)制和治療的研究也越來越引起人們的重視。為了探討各種

7、基因在成骨細(xì)胞中的表達(dá)以及外源性基因?qū)Τ晒羌?xì)胞的影響,建立一種簡單,高效的成骨細(xì)胞培養(yǎng)方法成為目前各種科學(xué)研究的必要條件。目前原代培養(yǎng)的成骨樣細(xì)胞方法很多,各種方法獲得的細(xì)胞數(shù)量、活性多不一致。筆者的研究在于通過不斷的摸索,獲得一種既操作簡單,又能獲得細(xì)胞量較多且成活率較高的原代細(xì)胞培養(yǎng)方法,為下一步的實(shí)驗(yàn)奠定堅實(shí)的基礎(chǔ)1材料與方法1.1主要儀器、試劑及實(shí)驗(yàn)動物出生24h內(nèi)的SD大鼠6只(吳氏實(shí)驗(yàn)動物),DMEM培養(yǎng)基(HycloneX胎牛血清(Hyclone