HIV作業(yè)指導(dǎo)書(shū)2

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1、質(zhì)量管理體系文件（三）HIV篩查實(shí)驗(yàn)室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)（第一版）宜昌市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科2009年4月20日序號(hào)主題內(nèi)容代號(hào)頁(yè)號(hào)1修訂頁(yè)JYK-H1V-XDY42批準(zhǔn)書(shū)JYK-H1V-PZS53人類(lèi)免疫缺陷病毒（HTV）抗體檢測(cè)JYK-HTV-0164室內(nèi)質(zhì)控作業(yè)指導(dǎo)書(shū)JYK-HTV-02105酶標(biāo)分析儀作業(yè)指導(dǎo)書(shū)JYK-HTV-03136BTO-RAD全自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)JYK-HTV-0415生物安全柜使用作業(yè)指導(dǎo)書(shū)JYK-HTV-05生物女全機(jī)維護(hù)和保養(yǎng)作業(yè)指導(dǎo)1!；JYK-H1V-06修訂頁(yè)序號(hào)文件編號(hào)頁(yè)碼需更改的內(nèi)容更改內(nèi)容批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期1234

2、5678910111213141516171819批準(zhǔn)書(shū)本《作業(yè)指導(dǎo)卩》依據(jù)IS015189：2003《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室一質(zhì)量和能力的專(zhuān)用耍求》標(biāo)準(zhǔn)編制而成，它闡述了宜昌市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科的質(zhì)量方針和質(zhì)量目標(biāo)，并對(duì)各項(xiàng)質(zhì)量的技術(shù)活動(dòng)的工作程序、操作方法作了具體描述和規(guī)定，是木實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)質(zhì)量和技術(shù)活動(dòng)所依據(jù)的指導(dǎo)書(shū)。HTV篩查實(shí)驗(yàn)室全體人員必須嚴(yán)格遵守并認(rèn)真執(zhí)行。木《HJLV篩査實(shí)驗(yàn)室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)》第一版已經(jīng)檢驗(yàn)科管理層審定，現(xiàn)予批準(zhǔn)，并自批準(zhǔn)之日起生效。批準(zhǔn)人簽字：批準(zhǔn)人職務(wù)：宜昌市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科主任批準(zhǔn)H期:1.原理采用雙抗原夾心兩步法檢測(cè)人血清或血漿樣本

3、中的（HIV1/2）型抗體。采用多種HTV-1和HTV-2的特異性抗原制作預(yù)包被板及酶結(jié)合物。當(dāng)待檢樣木中存在HIV抗體吋，在反應(yīng)過(guò)稈中形成“固相HIV抗原-HIV抗體-酶標(biāo)記HIV抗原”的免疫復(fù)合物，加入底物后形成顯色反應(yīng)。2.標(biāo)本采集2.1采集前病人準(zhǔn)備：受檢者應(yīng)空腹2.2標(biāo)本種類(lèi)：血清或血漿2.3標(biāo)本耍求：采集病人靜脈血3ml（可用EDTA抗凝），室溫放置不超過(guò)4小時(shí)，分離血清備用。3.標(biāo)本儲(chǔ)存：2-8°C保存不應(yīng)超過(guò)1周，-20°C不應(yīng)超過(guò)3個(gè)刀，-70°C長(zhǎng)期保存，應(yīng)避免反復(fù)凍融。4.標(biāo)本運(yùn)輸：密封，室溫運(yùn)輸。5.標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：污染、標(biāo)木量不足、

4、嚴(yán)重溶血或脂血標(biāo)本不宜作此項(xiàng)檢測(cè)。6.試劑6.1試劑名稱(chēng)：人類(lèi)免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒（雙抗原夾心臨聯(lián)免疫法）6.2試劑生產(chǎn)廠家：英科新創(chuàng)（廈門(mén)）科技有限公司6.3包裝規(guī)格：96人份/盒6.4試劑盒組成:微孔板，酶標(biāo)抗原，陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照，洗滌液，顯色劑A,顯色劑B,終止液，封片，自封袋，說(shuō)明書(shū)。6.5試劑儲(chǔ)存條件及有效期：2-8°C避光保存，有效期十二個(gè)月。7.儀器設(shè)備7.1儀器名稱(chēng)：自動(dòng)酶標(biāo)儀7.2儀器廠家：芬蘭雷勃7.3儀器型號(hào)：MK38.操作步驟8.1平衡：將試劑盒各組分取出，平衡至室溫（18-25°C）,微孔板開(kāi)封后按需要取川，余者及時(shí)以自封

5、袋封存。8.2配液：濃縮洗滌液配制前充分搖勻（如有晶體應(yīng)充分溶解），濃縮洗滌液和裁綢水或去離子水按1：19稀釋后使用。8.3編號(hào)：將微孔條固定于支架，按序編號(hào)。8.4加樣：每孔加入待測(cè)樣品50卩1,對(duì)照孔屮分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照各50卩1,并設(shè)空白對(duì)照1孔，封板。6.5溫育：置37°C溫育30分鐘。8.6洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌完扣干（每次應(yīng)保持30-60秒的浸泡時(shí)間）。8.7加酶：分別在每孔中加入酶標(biāo)抗原100口（空白對(duì)照空除外），封板。8.8溫育：置37°C溫育30分鐘。8.9洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌完扣干（每次應(yīng)保持30-60秒的浸泡時(shí)

6、間）。8.10顯色：每孔加入顯色劑A、B各50口，充分混勻，置37°C孵育20分鐘。8.9終止：每孔加入終止液50Ml,混勻。8.10測(cè)定：用酶標(biāo)儀雙波長(zhǎng)450/630nm測(cè)定各孔00值（30分鐘內(nèi)完成測(cè)定，并記錄結(jié)果）。9.結(jié)果判斷與分析7.1陽(yáng)性對(duì)照值應(yīng)大于陰性對(duì)照值0.60以上且陰性對(duì)照值小于0.10方可認(rèn)為本次實(shí)驗(yàn)有效6.2參考值cut-offvalue（C0V）二陰性對(duì)照孔0D值+0.10（陰性對(duì)照0D值低于0.05吋以0.05計(jì)算）9.3結(jié)果判定：樣品的0D值大于或等于C0V值時(shí)，說(shuō)明該樣品初篩為陽(yáng)性樣品的0D值小丁C0V值時(shí)，說(shuō)明該樣品初篩為

7、陰性初篩陽(yáng)性者重新取樣雙孔復(fù)試，復(fù)試陽(yáng)性者應(yīng)按照“全國(guó)UTV檢測(cè)管理規(guī)范”送HTV確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室述行確認(rèn)試驗(yàn)。7.質(zhì)量控制每次試驗(yàn)用含lNCU/ml的質(zhì)控血清同步檢測(cè)，以S/C0值繪制質(zhì)控圖，S/C0值應(yīng)在控制范圍內(nèi)；如失控，則要檢查試劑效期、儲(chǔ)藏溫度、試驗(yàn)溫度是否正常、操作步驟是否正確，直至重新試驗(yàn)使其在控。8.參考范圍陰性9.臨床意義10.操作性能：靈敏度高，特異性好。11.方法局限性：樣品顯色深淺與樣品屮抗體的含量沒(méi)有一定正相關(guān)。12.注意事項(xiàng)15.1木檢測(cè)試劑僅用于體外診斷試驗(yàn)。僅用于人血清或血漿樣木，其它體液和樣品可能得不到準(zhǔn)確的結(jié)果。15.2本試劑

8、的使川單位必須是經(jīng)當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門(mén)批準(zhǔn)的H1V初篩實(shí)驗(yàn)室。15.3