花色色素分析實習(xí)

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1、實習(xí)“花色”第八學(xué)期園藝學(xué)対于花色色譜來說有三類結(jié)構(gòu)完全不同的物質(zhì)：類黃酮、類胡蘿卜素和甜菜堿。其中類黃酮特別是花青索是最重耍的花色素。關(guān)于類黃酮生化和遺傳學(xué)方面的細節(jié)在附件一屮集屮列舉。I.萃取和鑒定花青素昔、花青素和其他類黃酮花青素和其他類黃酮可以利用1%的甲醇鹽酸（l%MeOH/HCl=97mlMethanol+3ml36%HC1）從花瓣或者其他植物部位萃取出來。為了防止花青素降解，萃取最好在暗處和4°C條件下進行。鹽酸能夠使花青索穩(wěn)定。根據(jù)需要和可支配時間不同可以選擇主動和被動萃取方法。（1）主動（快速）萃?。簩⒉糠趾谢ㄇ嗨氐闹参锝M織和少量1%的MeOH/HCl一塊在離心管里

2、面弄碎（用小鏟子）或者在研缽里而搗碎，纟H織殘渣可以選擇離心去掉。優(yōu)點：■快速萃取-得到濃縮的花青素蘋取物，可以立即用來進行分光光度計檢測或者色譜檢測缺點：■對于定量分析來說不是十分精確，或許不是所有的色素能夠被同時萃取出來■對于大量樣本的試驗來說，消耗大量的操作時間（2）被動（慢速）萃?。簩⒑谢ㄇ嗨鞯慕M織放在密封良好的器皿里而（離心管、燒瓶等）用1%的MeOH/HCl淹沒，然后放在4度暗處（冰箱里面）幾天甚至幾周萃取優(yōu)點：■大量樣本時減少萃取操作時間■可以進行定性分析，例如1克花放在20-40ml1%的MeOH/HCl里面萃取大約40個小時，隨厲可以用分光光度計來測量其禽量缺點：-

3、萃取時間長-萃取物需要一般悄況下需要在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀里面濃縮后才能用來進行色譜分析。被動萃取同樣對于其他類黃酮（例如黃酮醇、黃酮、黃烷酮、二輕黃酮醇）的提取具有優(yōu)勢。盡管他們的萃取液不是1%的MeOH/HCl而是乙酸乙酯（Ethylacetat-EtoAc）.這樣的話在其他類黃酮被萃取出的時候，花青素就能保留在水相里而。不管哪種萃取方法，萃取物都可以在4度暗處超過一個月甚至一年保存。被萃取的植物組織應(yīng)該在保存前去掉（離心、過濾）。實習(xí)內(nèi)容：?用1%的MeOH/HCl主動和被動萃取一種植物兩個品種（系）不同花色的花?用MeOH（不含鹽酸）被動萃取這些甜系?用EtoAc（CH3C00C2H5）

4、被動萃取這些品系II.分光光度計檢測類黃酮在600nm和2（）（）nm區(qū)域附近具有兩個吸收峰的特征譜，一個在可見光區(qū)域（峰I）,另一個在紫外區(qū)域（峰II）。在用1%的MeOH/HCl萃取的Anthocyanin及Anthocyanidin峰I的吸收值為天竺葵素Pelargonidin（Pg）:520nm,Pelargonidin-Glycoside:505-512nm矢車菊素Cyanidin(Cy):535nm,Cyanidin-Glycoside:523-528nm飛燕草素Delphinidin(Dp):545nm,Delphinidin-Glycoside:535-538nm峰II

5、一般情況下吸收高峰位于275nm0其他類黃酮的吸收光譜人多數(shù)是衣純甲醇里面測量，其屮列舉下述吸收值：對于黃酮醇Flavonol(例如山蔡酚Kaempferol(Km),{M皮素Quecetin(Qu),楊梅素Myricetin(My))和他們的糖昔(Glycoside)來說,峰I位于350nm和380之間,峰II位于266nm和275nm之間。對于黃酮Flavone(例如芹菜素Apigenin(Ap),木犀草素Lueolin(Lu))以及他們的糖昔來說，峰I位于330nm和350之間，峰II位于270nm附近。二氫黃酮醇Dihydroflavonol(例如Dihydrokaempfer

6、ol(DHK),Dihydroquercetin(DHQ),Dihydromyricetin(DHM))只在紫外區(qū)域290nm處有一個吸收峰。黃烷酮(例如柚皮素Naringenin(Nar),圣草酚Eriodictyol(Eri))也只在288nm含冇一個峰。吸收光譜需要在紫外對見分光光度計測暈。測量通過在600nm和200nm之間對比類黃酮萃取液和溶液的光吸收差別進行(Extinktion)□測量必須用石英比色杯，因為蜩料比色杯不適于測量用，因為塑料木身在紫外區(qū)域也有吸收。作業(yè)：(1)測量特定類黃酮的吸收光譜。天竺葵素、飛燕草素、矢車菊素以及他們的糖甘及山荼酚、懈皮索、芹菜索、木犀草

7、索的原液(1mg/mll%MeOH/HCl)作測量用。20W原液稀?釋到1480山1%MeOH/HCl后放置到1.5ml石英比色杯以稀釋液做對照進行測量。(2)測量花瓣的萃取物的吸收光譜，萃取液用1%MeOH/HCl稀釋，直到所有的垂要的峰都能夠在分光光度計的測量范圍內(nèi)顯現(xiàn)(吸收值最好位于0.5和1.5Z間)。評估：■收集最重耍的峰?標樣與花朵萃取物的最大值?糖基化對吸收峰最大值有什么影響?在萃取的花里而，哪些花青素甘可能是成色的主要組成部分。