高效液相色譜法知識匯總大全集(最新最值得收藏的資險

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1、高效液相色譜法知識匯總大全集（最新最值得收藏的資料整理）HPLC應用一、樣品測定1．流動相比例調(diào)整：由于我國藥品標準中沒有規(guī)定柱的長度及填料的粒度，因此每次新開檢新品種時幾乎都須調(diào)整流動相（按經(jīng)驗，主峰一般應調(diào)至保留時間為6~15分鐘為宜）。所以建議第一次檢驗時請少配流動相，以免浪費。弱電解質(zhì)的流動相其重現(xiàn)性更不容易達到，請注意充分平衡柱。2．樣品配制：①溶劑；②容器：塑料容器常含有高沸點的增塑劑，可能釋放到樣品液中造成污染，而且還會吸留某些藥物，引起分析誤差。某些藥物特別是堿性藥物會被玻璃容器表面吸附，影響樣品中藥物的定量回收，因此

2、必要時應將玻璃容器進行硅烷化處理。3．記錄時間：第一次測定時，應先將空白溶劑、對照品溶液及供試品溶液各進一針，并盡量收集較長時間的圖譜（如30分鐘以上），以便確定樣品中被分析組分峰的位置、分離度、理論板數(shù)及是否還有雜質(zhì)峰在較長時間內(nèi)才洗脫出來，確定是否會影響主峰的測定。4．進樣量：藥品標準中常標明注入10ml，而目前多數(shù)HPLC系統(tǒng)采用定量環(huán)（10ml、20ml和50ml），因此應注意進樣量是否一致。（可改變樣液濃度）5．計算：由于有些對照品標示含量的方式與樣品標示量不同，有些是復合鹽、有些含水量不同、有些是鹽基不同或有些是采用有效部

3、位標示，檢驗時請注意。6．儀器的使用：①流動相濾過后，注意觀察有無肉眼能看到的微粒、纖維。有請重新濾過。②柱在線時，增加流速應以0.1ml/min的增量逐步進行，一般不超過1ml/min，反之亦然。否則會使柱床下塌，叉峰。柱不線時，要加快流速也需以每次0.5ml/min的速率遞增上去（或下來），勿急升（降），以免泵損壞。③安裝柱時，請注意流向，接口處不要留有空隙。④樣品液請注意濾過（注射液可不需濾過）后進樣，注意樣品溶劑的揮發(fā)性。⑤測定完畢請用水沖柱1小時，甲醇30分鐘。如果第二天仍使用，可用水以低流速（0.1~0.3ml/min）沖

4、洗過夜（注意水要夠量），不須沖洗甲醇。另外需要特別注意的是：對于含碳量高、封尾充分的柱，應先用含5~10%甲醇的水沖洗，再用甲醇沖洗。⑥沖水的同時請用水充分沖洗柱頭（如有自動清洗裝置系統(tǒng)，則應更換水）。二、方法研究1．波長選擇：首先在可見紫外分光光度計上測量樣品液的吸收光譜，以選擇合適的測量波長，如最靈敏的測量波長并避開其它物質(zhì)的干擾。從紫外光譜中還可大體知道在HPLC中的響應值，如吸收度小于0.5時，HPLC測定的面積將會很小。2．流動相選擇：盡量采用不是弱電解質(zhì)的甲醇-水流動相。附件：高效液相色譜法（HPLC）復核細則一、對起草單

5、位的要求：1．HPLC法用于藥品的有關(guān)物質(zhì)檢查或含量測定時，需提供建立HPLC法的依據(jù)及參考文獻。2．應對建立的方法進行論證，按照中國藥典2000年版二部凡例與附錄收載的藥品質(zhì)量標準分析方法驗證項下所列的要求進行試驗。3．建立方法時，應考慮下列事項：①首選填料為十八烷基鍵合硅膠，并至少對兩根不同品牌的色譜柱進行比較試驗，其中一根為國產(chǎn)柱。②流動相首選甲醇-水系統(tǒng)，應盡可能少用含有緩沖液的流動相，如為堿性藥物，流動相的pH值應為7~8；如為酸性藥物，流動相的pH值應為3~4。③盡可能選用流動相作為溶劑，如未能選用，應說明原因。④內(nèi)標物應

6、首選易得到的純度較高的化學試劑或?qū)φ掌罚瑧c待測物質(zhì)化學結(jié)構(gòu)相似，理化性質(zhì)接近，峰的響應值相當，以及分離度應大于1.5，另應考慮對照品的來源問題。⑤檢測器首選UV檢測器。4．采用HPLC法進行有關(guān)物質(zhì)檢查時，如雜質(zhì)峰的響應值與主成分峰的響應值相差太大，應首選自身對照法，而不宜選用面積歸一化法。5．HPLC法用于原料藥的含量測定。如以內(nèi)標法測定含量，應考慮內(nèi)標物是否含有干擾供試品的雜質(zhì)；如以外標法測定含量，對照品與供試品應各取樣2份，對照晶溶液各進樣3次，供試品溶液各進樣2次，計算相對標準差（RSD應不得大于l.5％）。二、對復核單位的

7、要求：http://hplc2.blog.163.com/blog1．按照起草單位提供的色譜條件與方法進行復核。2．當HPLC法用于有關(guān)物質(zhì)的檢查時，應進行最低撿出量試驗。3．應考慮對同一樣品分析結(jié)果的重現(xiàn)程度、方法的可行性，并作出評價。4、流動相使用前為什么要脫氣？流動相使用前必須進行脫氣處理，以除去其中溶解的氣體（如O2），以防止在洗脫過程中當流動相由色譜柱流至檢測器時，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣泡會增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無法分析。溶解的氧氣還會導致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用FLD

8、，可能會造成熒光猝滅。常用的脫氣方法比較：氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。加熱回流法：效果較好，但操作復雜，且有毒性揮發(fā)污染。抽真空脫氣法：易抽走有機相。超聲脫氣法：流動相放