自動(dòng)生化分析儀分析參數(shù)設(shè)置

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1、自動(dòng)生化分析儀是一種把生化分析中的取樣、加試劑、去干擾物、混合、恒溫反應(yīng)、自動(dòng)監(jiān)測(cè)、數(shù)據(jù)處理以及實(shí)驗(yàn)后清洗等步驟進(jìn)行自動(dòng)化操作的儀器，它完全模仿并代替了手工操作，目前已經(jīng)成為醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行臨床診斷所必可不少的儀器之一。它的應(yīng)用大大提高了生化檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性、精密度和工作效率，適應(yīng)了臨床醫(yī)學(xué)發(fā)展對(duì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的要求，然而這一切不僅需要生化分析儀的技術(shù)基礎(chǔ)，也需要儀器內(nèi)每個(gè)項(xiàng)目都有一組最優(yōu)化的分析參數(shù)。并且目前大多數(shù)生化分析儀為開(kāi)放式，封閉式的儀器一般也會(huì)另外留一些檢測(cè)項(xiàng)目的空白通道由用戶(hù)自己設(shè)定分析參數(shù)，因此我們有必要了解生化分析儀各個(gè)分析參數(shù)的基

2、本含義以及設(shè)置方法。1.試驗(yàn)名稱(chēng)常以項(xiàng)目的英文縮寫(xiě)來(lái)設(shè)置，如總蛋白設(shè)置為T(mén)P，白蛋白設(shè)置為ALB等。2.方法類(lèi)型生化分析儀常用的方法有終點(diǎn)法、連續(xù)監(jiān)測(cè)法、比濁法等，根據(jù)被檢物質(zhì)的檢測(cè)原理等選擇其中一種分析方法。2.1終點(diǎn)法又稱(chēng)為平衡法，是基于反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特征及其對(duì)光吸收強(qiáng)度的大小對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量分析的一類(lèi)方法，有一點(diǎn)終點(diǎn)法和兩點(diǎn)終點(diǎn)法兩類(lèi)。一點(diǎn)終點(diǎn)法的特點(diǎn)是使用一種或兩種試劑，當(dāng)待測(cè)物與試劑反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)時(shí)，測(cè)定混合溶液的吸光度來(lái)計(jì)算待測(cè)物的濃度，該法常用的有總蛋白雙縮脲法、白蛋白溴甲酚綠法、葡萄糖氧化酶法等，手工操作的

3、大多數(shù)方法都是一點(diǎn)終點(diǎn)法。兩點(diǎn)終點(diǎn)法也稱(chēng)固定時(shí)間法，如果是單試劑分析，當(dāng)測(cè)定波長(zhǎng)同干擾物質(zhì)的吸收光譜有重疊時(shí)，通過(guò)選用兩點(diǎn)終點(diǎn)法可消除樣品空白引起的干擾，其分析過(guò)程是在樣品與試劑混合后經(jīng)過(guò)一段延滯期讀取一個(gè)點(diǎn)A1，一定時(shí)間后再讀取A2，然后比較標(biāo)準(zhǔn)和測(cè)定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待測(cè)物的濃度。肌酐苦味酸法就是一個(gè)典型的單試劑兩點(diǎn)法的例子。如果是雙試劑分析，選用二點(diǎn)終點(diǎn)分析法除了可消除樣品空白引起的干擾外，還可消除內(nèi)源性干擾物質(zhì)的干擾，其分析過(guò)程是加入試劑1后讀取A1，加入試劑2后讀取A2，A1相當(dāng)于讀出樣品空白值，A2才是實(shí)際呈

4、色反應(yīng)，然后比較標(biāo)準(zhǔn)和測(cè)定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待測(cè)物的濃度。為了提高終點(diǎn)法檢測(cè)的準(zhǔn)確性，選擇該法時(shí)應(yīng)設(shè)置終點(diǎn)法零點(diǎn)讀數(shù)、樣品空白等兩個(gè)分析參數(shù)，前者是在反應(yīng)前即開(kāi)始讀數(shù)，可以扣除反應(yīng)前試劑和樣品混合液的空白讀數(shù)；后者是樣品加空白試劑所得到的吸光度，反應(yīng)需要占用一個(gè)比色杯。2.2連續(xù)監(jiān)測(cè)法又稱(chēng)動(dòng)態(tài)分析法、速率法等，基本原理是在酶促反應(yīng)的最適條件下，用物理、化學(xué)或酶促反應(yīng)的分析方法，在反應(yīng)速度恒定期（零級(jí)反應(yīng)期）內(nèi)連續(xù)觀察和記錄一定反應(yīng)時(shí)間內(nèi)底物或產(chǎn)物量的變化，以單位時(shí)間酶反應(yīng)初速度計(jì)算出酶活力的大小和代謝物的濃度。具體方法有

5、兩點(diǎn)速率法和多點(diǎn)速率法：兩點(diǎn)速率法是通過(guò)觀察在零級(jí)反應(yīng)期內(nèi)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的吸光度，用兩個(gè)點(diǎn)的吸光度的差值（ΔA）除以時(shí)間（分），計(jì)算出每分鐘的吸光度變化值；多點(diǎn)速率法是在零級(jí)反應(yīng)期內(nèi)每隔一定時(shí)間（2-30s)進(jìn)行一次監(jiān)測(cè)，連續(xù)監(jiān)測(cè)多次，求出單位時(shí)間內(nèi)的反應(yīng)速度，這種方法又可分為最小二乘法、多點(diǎn)δ法、回歸法、帶速率時(shí)間法等。該法具有明顯的優(yōu)點(diǎn)就是大大提高了分析速度和準(zhǔn)確性，主要適用于酶活性及其代謝產(chǎn)物的測(cè)定。在連續(xù)監(jiān)測(cè)法過(guò)程中，即使不加樣品，試劑中的底物也會(huì)自動(dòng)降解得到一個(gè)結(jié)果，因此應(yīng)設(shè)置試劑空白速率，不同批號(hào)試劑的試劑空白速率不一樣，其值為

6、以水代樣品測(cè)得的項(xiàng)目結(jié)果，樣品測(cè)定結(jié)果應(yīng)扣除試劑空白速率的數(shù)值。2.3比濁法自動(dòng)生化分析儀一般只能做透射免疫比濁分析，當(dāng)光線(xiàn)通過(guò)一定體積的含免疫復(fù)合物的溶液時(shí)，由于溶液中存在的抗原-抗體復(fù)合物粒子對(duì)光線(xiàn)的反射和吸收，引起透射光的減少，測(cè)定的光通量和抗原抗體復(fù)合物的量成反比。它常用于終點(diǎn)法測(cè)定，目前主要用于血清特種蛋白的檢測(cè)，如載脂蛋白、微量蛋白、急性時(shí)相反應(yīng)蛋白、免疫球蛋白以及某些藥物監(jiān)測(cè)等。但是如果樣品中待測(cè)抗原濃度過(guò)高，抗原與抗體形成的免疫復(fù)合物分子將會(huì)變小，而且易發(fā)生解離，使?jié)岫确炊陆?，因此免疫比濁分析過(guò)程中必須設(shè)置前區(qū)檢查，比

7、較分析過(guò)程中后兩個(gè)讀數(shù)點(diǎn)的差別，如果后一點(diǎn)比前一點(diǎn)的吸光度低，則表示抗原已過(guò)剩，應(yīng)將樣品稀釋后重測(cè)。3.反應(yīng)溫度自動(dòng)生化分析儀通過(guò)溫度控制系統(tǒng)保持溫度恒定，以保證反應(yīng)的正常進(jìn)行，其保持恒溫的方式有三種：干式恒溫器加熱、水浴式循環(huán)加熱、恒溫器循環(huán)間接加熱。恒溫控制器可以對(duì)25℃、30℃、37℃三種溫度進(jìn)行恒溫，根據(jù)需要可以任意選擇，半自動(dòng)生化分析儀恒溫器屬于這種。全自動(dòng)生化分析儀的溫度控制器一般只能控制37℃一種溫度，少數(shù)也可以控制30℃和37℃兩種溫度。4.反應(yīng)波長(zhǎng)當(dāng)測(cè)定體系中只有一種組分或混合溶液中待測(cè)組分的吸收峰與其他共存物質(zhì)的吸收

8、波長(zhǎng)無(wú)重疊時(shí)，可選用單波長(zhǎng)，如果待測(cè)物質(zhì)有幾個(gè)吸收峰，可選用吸光度最大的一個(gè)波長(zhǎng)，或者選擇在吸收峰處吸光度隨波長(zhǎng)變化較小的某個(gè)波長(zhǎng)。當(dāng)被檢溶液混濁或存在較多的干擾物質(zhì)時(shí)，測(cè)定過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)光散射和非特異性光吸