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《色譜柱的分類及特點》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、3-1柱的結(jié)構(gòu) 1、堵棒(或?qū)Ч埽?、接頭 3、接頭 4、密封圈 5、螺帽 6、柱密封圈 7、柱管 8、柱填料 9 10、過濾片 ?3-2柱的分類:根據(jù)所有的擔體材料分為三種: a.硅膠型:機械強度高,易制成小顆粒,理論塔板數(shù)高。 b.聚全物型:在廣泛的PH值范圍內(nèi)穩(wěn)定 c.羥基磷灰石型:對蛋白質(zhì)等生物高分子樣品有特殊的選擇性。根據(jù)分離方式分類: a.硅膠型 1)正相:SIL--磷脂、NH--糖、維生素E,CN--甾類激素?! ?)反相:ODS(C18)、(C8CNTMSPheny1)低分子量化全物?! ?)離子交換:
2、 WAX(弱堿陰離子交換)--核苷酸、蛋白質(zhì) WCX(弱酸陽離子交換)--蛋白質(zhì) SAX(強堿陰離子交換)--核苷酸 SCX(強酸陽離子交換)--兒茶酚膠 4)凝膠過濾: Diol--蛋白質(zhì)GF--蛋白質(zhì) b.聚合物型: 1)反相:ODP--50--肽,蛋白質(zhì),低分化合物?! ?)離子交換:ISC--氨基酸,胍類化合物,ISA--糖,IC--無機離子,PA--蛋白質(zhì),ES--蛋白質(zhì)?! ?)配位交換:SCR(磺化聚苯乙烯)--糖?! ?)離子排阻:SCR-101H102H--有機酸 5
3、)凝膠過濾:ION--多糖GS--水溶性分子 6)凝膠滲透色譜(GPC):GPD--合成分子、橡膠。 7)羥基磷灰石型:HPC--蛋白質(zhì)、核苷酸按尺寸分類: 1.制備:30mm50mm內(nèi)徑,半制備:20mm內(nèi)徑?! ?.分析:標準型柱:4_8mm內(nèi)徑?! 】焖偕V柱:3mm內(nèi)徑、5cm長、4.6mm內(nèi)徑?! ⌒】讖街?.5mm內(nèi)徑,微孔徑柱1mm內(nèi)徑。3-3柱的技術(shù)指標 *耐壓:不小于40Mpa?! ?滲透性:反相--流動相甲醇1ml/min,壓力3Mpa。 正相--正乙烷1ml/min,壓力3Mp
4、a. *柱效:理論塔板極數(shù)>3x103?! ?對稱柱:葸峰不對稱因子AS在0.8~2.0范圍內(nèi)?! ?外觀:光潔、標牌、尺寸、填充劑、流動相方向、日期等。ODS柱 ODS(C18)色譜柱是將十八烷基鍵合在擔體的表面,然后填充的柱,在HPLC中應(yīng)用廣。在HPLC中反相色譜的引用占70%,其中極大部分使用的是ODS(C18)。本公司所附的柱也是ODS(C18)柱,內(nèi)徑4.6mm,長度150mm。一般反相色譜系統(tǒng),流動相為極性溶劑,如水、甲醇、乙腈,非極性固定相,如十八烷基。反相系統(tǒng)簡單,重復(fù)性好,柱子能長期穩(wěn)定工作,能完成分離、分析任務(wù)的6
5、0-80%,所以分析工作者使用得最多的是反相柱。柱的使用和維護 由于柱的質(zhì)量直接影響到樣品組分得分離情況,組分的定性,定量分析,所以在操作時必須十分注意。 通常柱子損壞表現(xiàn)為:柱壓升高,柱效下降,保留值改變,峰形崎變等。以反相為列,它要求填料處于甲醇或乙腈中,不使柱子干枯,并注意下列事項: *勿使柱子受較強振動 *較長時間不用時,應(yīng)在柱中充滿甲醇,并把兩頭封死,盡量不使干枯。 *當用水和甲醇(或乙腈)混合液體溶劑時,工作結(jié)束后必須用純甲醇沖洗30分鐘至1個小時,使柱子處于甲醇中,因水 易繁殖微生物,使柱子堵塞,并降低柱效。
6、*當使用KH2PO4等緩沖液時,鹽的濃度宜低,否則鹽容易析出,柱效降低,柱壓升高,使用后 必須用水沖洗(絕不能用甲醇沖洗)使緩沖液全部溶于水排出,然后再用甲醇沖洗。 *硅基固定相不宜在PH>8時使用,此時容易產(chǎn)生絮狀物析出,堵塞柱子?! ?當流動相呈酸性時,使用后必須用水沖洗,因酸使柱效降低,后再用甲醇沖洗?! ?流動相最好經(jīng)過過濾處理?! ?樣品最好也經(jīng)過過濾處理。 *樣品有時能復(fù)蓋填料得活性點,使柱壓升高,保留時間下降,防止方法是樣品經(jīng)過過濾?! ?樣品組分的不可逆吸附,使柱壓升高,柱效降低(通常易被吸附的有蛋白質(zhì)、糖)防止方法
7、是加保護柱和溶劑反沖, 最常用的是四氫呋喃。 *當流動相從A換到B時,A、B不相溶,必須選擇一能同A、B互溶劑C,先換成C再把C換成B,最常用的中間液是異丙醇。 *由于長期使用,在較大的壓力下,擔體破裂而流失在柱前端形成一段空隙,使柱效下降,峰形畸變。維護方法:卸下 接頭,用甲醇把填料調(diào)成糊狀,填入柱內(nèi),同時將過濾片用超聲波清洗機清洗一次。?各種柱特點HypersilSilica??作為大多數(shù)鍵合相的基質(zhì)HypersilSilica(Hypersil硅膠)在使用過程中極具耐久性及重現(xiàn)性.未經(jīng)鍵合的硅膠(SiO2,Silica)色
8、譜柱對于非極性和中性有機物的正相色譜分析非常有效。??HypersilODS(C18)?????HypersilODS(C18)是硅膠基質(zhì)上鍵合了C18為官能團的色譜柱填料,是典