細胞培養(yǎng)實驗室的設(shè)置及設(shè)備

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1、動物組織細胞培養(yǎng)實驗室的設(shè)計姓名：梁洪學號：11310010214（一）環(huán)境要求組織細胞培養(yǎng)技術(shù)與其他一般實驗室工作的主要區(qū)別在于要求保持無菌操作，避免微生物及其他有害因素的影響。要求工作環(huán)境清潔,空氣清新,干燥和無煙塵。（二）面積與預(yù)算實驗室總面積96m3左右，大約耗資40萬（不含特殊先進設(shè)備）。（三）細胞培養(yǎng)實驗室的布局細胞培養(yǎng)實驗室布局大致為：無菌操作區(qū)、孵育區(qū)、制備區(qū)、清洗區(qū)、消毒滅菌處理區(qū)、儲藏區(qū)。1．無菌操作區(qū)（1）無菌操作室：無菌操作區(qū)只限于細胞培養(yǎng)及其他無菌操作的區(qū)域，最好能與外界隔離，不能穿行或受其他干

2、擾。無菌操作間的空氣消毒：紫外線燈，空氣過濾的恒溫恒濕裝置。（2）超凈工作臺：操作簡單，安裝方便，占用空間小且凈化效果很好。超凈工作臺工作原理（大致相同）—－通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過濾器初濾，由離心風機壓入靜壓箱，再經(jīng)高效空氣過濾器精濾，由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風速通過無菌區(qū)，從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環(huán)境。2．孵育區(qū)本區(qū)對無菌的要求雖不比無菌區(qū)嚴格，但仍需清潔無塵，因此也應(yīng)設(shè)置在干擾少而非來往穿行的區(qū)域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進行，后者費用高，一般實驗室多采用孵箱進行工作。3．制備區(qū)在該區(qū)主要進

3、行培養(yǎng)液及有關(guān)培養(yǎng)用的液體等的制備。4．儲藏區(qū)主要存放各類冰箱、干燥箱、液氮罐、無菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等，此環(huán)境也需要清潔無塵。5．清洗和消毒滅菌區(qū)清潔和消毒滅菌區(qū)應(yīng)與其他區(qū)域分開，主要進行所有細胞培養(yǎng)器皿的清洗、準備、消毒及三蒸水制備等工作。(四)細胞培養(yǎng)實驗室的設(shè)備1.常用的基本設(shè)備（1）儀器：a）顯微鏡：倒置顯微鏡——是組織細胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設(shè)備之一，便于掌握細胞的生長情況并觀察有無污染等。b）培養(yǎng)箱：體外培養(yǎng)的細胞和體內(nèi)細胞一樣，需要在恒定的溫度下生存，大多數(shù)情況下，最適溫度是37℃，溫差變化一般不應(yīng)

4、超過±0.5℃。恒溫培養(yǎng)箱——應(yīng)選隔水式或晶體管自控溫培養(yǎng)箱，此類培養(yǎng)箱靈敏度高，溫度控制較穩(wěn)定。一般的恒溫培養(yǎng)箱價格較便宜。CO2培養(yǎng)箱——目前多數(shù)的細胞培養(yǎng)室已廣泛使用。CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點是能夠提供進行細胞培養(yǎng)時所需要的一定量的CO2（常用濃度為5％），易于使培養(yǎng)液的pH保持穩(wěn)定，適用于開放或半開放培養(yǎng)。c）干燥箱：用于細胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等須干熱消毒。干熱消毒時，電熱干燥箱升溫較高，一般需達到160℃以上。通常使用鼓風式電熱干燥箱。d）水純化裝置：細胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高，細胞培

5、養(yǎng)以及與細胞培養(yǎng)工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴格純化處理。水純化時可采用離子交換裝置或蒸餾器。e）冰箱：細胞培養(yǎng)室必須配備○a普通冰箱或冷藏柜——儲存培養(yǎng)液、生理鹽水、Hank’s液試劑等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標本?！餬低溫冰箱（-20℃）、超低溫冰箱——用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長時期存放的制劑，如酶、血清等。——細胞培養(yǎng)室的冰箱應(yīng)屬專用，不得存放易揮發(fā)、易燃燒等對細胞有害的物質(zhì)，且應(yīng)保持清潔。f）細胞冷凍儲存器：儲存器常用的是液氮容器。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購置液氮容器時要綜合考慮容

6、積大小，取放使用方便及液氮揮發(fā)量（經(jīng)濟）三種因素。g）離心機：進行細胞培養(yǎng)時，常規(guī)需要進行制備細胞懸液、調(diào)整細胞密度、洗滌、收集細胞等工作，通常需要使用離心機。h）天平：常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。i）消毒器：直接或間接與細胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。常用：高壓蒸汽滅菌鍋，手提式高壓蒸汽消毒器j）濾器：常使用的濾器有Zeiss濾器、玻璃濾器和微孔濾器（2）培養(yǎng)用器皿：培養(yǎng)瓶：由玻璃或塑料制成。主要用于培養(yǎng)、繁殖細胞。進行培養(yǎng)時培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞，膠塞多用于密封培養(yǎng)。培養(yǎng)皿：由玻璃或塑料制成，供盛

7、取、分離、處理組織或做細胞毒性、集落形成、單細胞分離、同位素摻入、細胞繁殖等實驗使用。多孔培養(yǎng)板：為塑料制品?？晒┘毎寺〖凹毎拘缘雀鞣N檢測實驗使用。其優(yōu)點是節(jié)約樣本及試劑，可同時測試大量樣本，易于進行無菌操作。c）其他用品：尚有收集細胞用的離心管，放置試劑或臨時插置吸管用的試管，裝放吸管以便消毒的玻璃或不銹鋼容器，用于存放小件培養(yǎng)物品便于高壓消毒的鋁制飯盒或貯槽，套于吸管頂部的橡膠吸頭，封閉各種瓶、管的膠塞、蓋子、凍存細胞用的安瓿或凍存管、不同規(guī)格的注射器、燒杯和量筒以及漏斗，超凈工作臺使用的酒精燈，供實驗人員操作前

8、清潔消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型噴壺等。（3）器械：主要用于解剖、取材、剪切組織及操作時持取物件。常用的有：手術(shù)刀或解剖刀、手術(shù)剪或解剖剪（彎剪及直剪），用于解剖動物、分離及切剪組織，制備原代培養(yǎng)的材料；眼科虹膜小剪（彎剪或直剪），用于將組織材料剪成小塊；血管鉗及組織鑷、眼科鑷（彎、直），用于持取無菌物品（