γ干擾素釋放試驗(yàn)臨床應(yīng)用的價(jià)值、問題與展望.pdf

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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)·述評(píng)·空墾墮瘥苤查；!!!生!旦筮!!鲞筮!塑￡b墮』壘坐韭!!!!!!』!!Y!!!!!y!!：i!：塑!：!丫干擾素釋放試驗(yàn)臨床應(yīng)用的價(jià)值、問題與展望吳雪瓊梁艷王國(guó)治我國(guó)的結(jié)核病疫情和結(jié)核分枝桿菌(Mtb)感染情況都相當(dāng)嚴(yán)重。潛伏結(jié)核感染(1atenttubercu—losisinfection，LTBI)是宿主感染Mtb后、沒有結(jié)核病臨床表現(xiàn)和影像學(xué)改變的一種帶菌狀態(tài)。應(yīng)用PPD試驗(yàn)檢測(cè)，我國(guó)LTBI率約為44．5％～50．2％[卜23；應(yīng)用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(enzyme-linkedimmunospotassay，ELISP()T)檢測(cè)，健康人群LTBI率約為15

2、．4％～30．7％[2’3]。LTBI者未經(jīng)治療約有5％～10％會(huì)發(fā)展成活動(dòng)性結(jié)核病，若同時(shí)伴有HIV感染，這種概率會(huì)更高，LTBI者是結(jié)核病患者的重要來(lái)源，新診斷的活動(dòng)性肺結(jié)核患者85％～90％是由其發(fā)展而來(lái)的。此外，2010年第五次全國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查結(jié)果顯示，15歲及以上人群活動(dòng)性肺結(jié)核的患病率為459／10萬(wàn)，涂陽(yáng)的肺結(jié)核患病率為66／10萬(wàn)[4]，這意味著臨床結(jié)核病患者中85．6％的活動(dòng)性肺結(jié)核是菌陰患者。由此可見，LTBI和菌陰結(jié)核病的診斷和鑒別診斷是當(dāng)前結(jié)核病防控中面臨的重大難題。盡管以結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)(tuberculinskintest，TST)作為評(píng)價(jià)LT

3、BI的方法存在爭(zhēng)議[5]，但長(zhǎng)期以來(lái)PPD試驗(yàn)依然是臨床上最常用且最簡(jiǎn)便的一種LTBI的主要檢測(cè)手段，反應(yīng)越強(qiáng)，表示結(jié)核感染可能性越大。由于PPD包含許多非結(jié)核分枝桿菌及卡介菌的共同抗原成分，因此PPD試驗(yàn)的特異度差，尤其是在實(shí)行卡介苗兒童計(jì)劃免疫的中國(guó)。近年來(lái)，7干擾素釋放試驗(yàn)(interferongammare—leaseassay，IGRA)作為一種新型的細(xì)胞免疫檢測(cè)技術(shù)已用于臨床檢測(cè)，但對(duì)其臨床價(jià)值存在較大爭(zhēng)議，為此中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)和《中華結(jié)核和呼吸雜志》編輯委員會(huì)組織專家撰寫了《7干擾素釋放試驗(yàn)在中國(guó)應(yīng)用的建議》[6]。筆者對(duì)于IGRAs在臨doi：10．3969／

4、j．issn．1000—6621．2015．07．002作者單位：100091北京，解放軍第三。九醫(yī)院全軍結(jié)核病研究所全軍結(jié)核病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室結(jié)核病診療新技術(shù)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(吳雪瓊、梁艷)；中國(guó)食品藥品檢定研究院菌苗一室(王國(guó)治)通信作者：吳雪瓊，Email：xueqiongwu@139．corn床應(yīng)用過程中大家所關(guān)切的問題進(jìn)行闡述，并對(duì)其應(yīng)用前景進(jìn)行展望。IGRAs在臨床應(yīng)用中存在的問題一、對(duì)IGRAs兩種技術(shù)的原理缺乏了解目前，臨床上應(yīng)用的結(jié)核感染T細(xì)胞免疫檢測(cè)的IGRAs技術(shù)有兩種：一是ELISPOT；一是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linkedimmunosorben

5、tassay，ELISA)。IGRA—ELISPOT方法(也稱為細(xì)胞檢測(cè))采用的ELISPOT技術(shù)是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與ELISA技術(shù)結(jié)合產(chǎn)生的新的檢測(cè)技術(shù)——固相酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)，可從25萬(wàn)個(gè)外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中檢出每個(gè)分泌7干擾素(IFN一了)的細(xì)胞[7]。結(jié)核感染者PBMCs被Mtb特異性抗原刺激后，活化的T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞分泌的IFN一7被位于細(xì)胞下方的包被在膜上的抗IFN一7單克隆抗體所捕獲，洗去細(xì)胞后，通過酶聯(lián)免疫顯色，在膜上細(xì)胞分泌IFN一7的相應(yīng)位置上顯現(xiàn)清晰可辨的斑點(diǎn)，通過顯微鏡人工計(jì)數(shù)或通過全自動(dòng)的斑點(diǎn)圖像分析儀計(jì)數(shù)斑點(diǎn)，1個(gè)斑點(diǎn)代

6、表1個(gè)分泌IFN-7的細(xì)胞，可計(jì)算出分泌IFN一7細(xì)胞的頻率，這些細(xì)胞被稱為斑點(diǎn)形成細(xì)胞(spotsformingceils，S1c—Cs)。斑點(diǎn)的強(qiáng)弱和數(shù)量反映了機(jī)體效應(yīng)T細(xì)胞對(duì)刺激物的反應(yīng)能力和分泌IFN-7的能力。因此，ELISPOT方法是在單細(xì)胞水平檢測(cè)IFN一7的分泌情況，重點(diǎn)檢測(cè)活細(xì)胞的功能，即檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞分泌IFN一7的能力及分泌IFN一7的細(xì)胞頻率，結(jié)果直觀、清楚；如果檢驗(yàn)員認(rèn)真遵循標(biāo)準(zhǔn)化的操作流程，重復(fù)性也較好，可直接反映機(jī)體的細(xì)胞免疫功能。IGRA—ELISA方法(全血檢測(cè))采用的是經(jīng)典的ELISA技術(shù)，可從1ml外周血中檢測(cè)出細(xì)胞分泌的IFN一丫的總量。結(jié)核感

7、染者外周血經(jīng)Mtb特異性抗原刺激后，活化的T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和少量的造血干細(xì)胞等分泌產(chǎn)生IFN一7，通過酶聯(lián)免疫顯色反應(yīng)，在酶標(biāo)儀上測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出分泌IFN一7的量。萬(wàn)方數(shù)據(jù)主圄墮匿銎壺；!!!生!旦筮!!鲞筮!塑堡bi壘』壘坐叢!!!!!!』!!z；!!!!y!!：i!!叢!：!如果IFN一丫水平升高，既有可能是分泌IFN一7的效應(yīng)T細(xì)胞數(shù)量增加，也有可能是單個(gè)細(xì)胞的分泌水平增加所致。因此，ELISA方法是在群體細(xì)胞水平檢測(cè)