豬偽狂犬病的凈化條件.pdf

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1、■　主題策劃豬偽狂犬病的凈化條件●偽狂犬病基因缺失疫苗：1.自然弱毒疫苗(缺失部分gE基因)2.基因工程缺失疫苗(雙缺失：TK、gE)●鑒別診斷技術(shù)：gE-ELISA區(qū)分疫苗免疫動(dòng)物和野毒感染動(dòng)物。嘉賓：郭萬柱（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物生物技術(shù)中心主任）苗免疫接種是防制和控制乃至根自然弱毒疫苗是通過非豬源細(xì)胞或同時(shí)又保持其較強(qiáng)的免疫原性，而其中缺疫除偽狂犬病的根本措施。早期的雞胚的反復(fù)傳代，或在某些誘(突)變劑的失的基因主要是偽狂犬病毒的毒力基因豬偽狂犬疫苗大多為弱毒苗和滅活苗，弱存在下，用高于通常的培養(yǎng)溫度在細(xì)胞培胸苷激酶(TK)，蛋白激酶(PK)，核苷還原毒苗和滅活苗在預(yù)防控制偽狂犬病方面

2、養(yǎng)物上反復(fù)繼代獲得，其基因組的內(nèi)部存酶(RR)和脫氧尿苷三磷酸激酶(dUTPase)雖然能起一定的作用，但是弱毒苗不能防在著多處的點(diǎn)突變以及一些基因的缺失，基因以及一些具有免疫原性的糖蛋白gG、止病毒在動(dòng)物體內(nèi)的復(fù)制和排出，即存在它是一種天然的基因缺失疫苗。在20世紀(jì)gE、gC、gD基因等。目前據(jù)此已成功構(gòu)建了著毒力返強(qiáng)和散毒的危險(xiǎn)；而滅活苗雖然60年代后，許多國家用不同的方法培育了以缺失主要毒力基因-TK基因?yàn)榇淼陌踩暂^好，但其免疫效率卻較低，免疫不少偽狂犬病弱毒疫苗株，其中應(yīng)用較為單基因缺失疫苗、雙基因缺失和多基因缺時(shí)用量較大、有時(shí)還可能導(dǎo)致注射部位腫廣泛的主要是匈牙利的Bar

3、tha株、羅馬尼失疫苗。脹，出現(xiàn)過敏反應(yīng)。因此，隨著對偽狂犬病亞的Bucharest株和BUK株等。3.1偽狂犬病毒TK-單基因缺失疫苗病毒分子生物學(xué)研究的不斷深入，基因工Bartha弱毒株疫苗基因組中主要毒力偽狂犬病毒的TK基因是主要的毒力程疫苗的研制成為新的熱點(diǎn)，先后有多株基因TK沒有缺失，因此與其它毒株相比，基因，對其進(jìn)行缺失便成為TK單基因缺失基因缺失疫苗問世，使最終根除偽狂犬病還存在著一定的毒力。疫苗。這種TK缺失的疫苗與以前在有致突成為可能。在美國和歐盟等國家已明確規(guī)Bucharest株用雞胚培養(yǎng)后制成的凍變劑存在下在細(xì)胞上篩選到的弱毒疫苗定僅能使用偽狂犬病gE-基因缺失疫

4、苗。干苗，僅適用于9日齡以上的仔豬和妊娠2有一個(gè)最顯著的特點(diǎn)，就是不存在毒力返現(xiàn)將幾種偽狂犬病疫苗的制備與使用特月齡的母豬，因其US區(qū)存在gE基因的缺強(qiáng)，因而更加安全。點(diǎn)介紹如下。失，與強(qiáng)毒株相比其毒力已大大減弱，對該毒株于1986年被美國批準(zhǔn)為上市妊娠母豬和仔豬都有一定的免疫作用。的第一個(gè)基因工程疫苗。1滅活疫苗值得注意的是自然弱毒疫苗雖然有在國內(nèi)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)生物技術(shù)中心，將分離的偽狂犬病病毒強(qiáng)毒用BHK-著較強(qiáng)的免疫效果，但因其主要毒力基因率先系統(tǒng)地對PRV的分子生物學(xué)進(jìn)行了研21細(xì)胞或IBRS-2傳代細(xì)胞培養(yǎng)，當(dāng)病毒的(TK)沒有缺失，未經(jīng)充分致弱或過度致弱究，并在國內(nèi)首次構(gòu)建了

5、PRVFa株TK基因增殖滴度達(dá)到要求時(shí)收獲病毒，滅活后加的疫苗株不僅不能誘導(dǎo)滿意的免疫保護(hù)缺失疫苗株，并對其免疫原性和保護(hù)力等入油乳劑而制成滅活苗。滅活疫苗安全性反應(yīng)，而且其毒力有很大返強(qiáng)的可能性，進(jìn)行了研究。好，不存在潛伏感染的問題，因而在各養(yǎng)還有可能引起疾病及免疫抑制；弱毒疫苗3.2偽狂犬病毒雙基因缺失疫苗豬場，尤其是種豬場以及未污染的養(yǎng)豬場還可建立潛伏感染，并存在散毒的可能，偽狂犬病毒雙基因缺失疫苗是在TK得到廣泛使用。滅活苗雖然安全，但由于在部分接種豬血清中雖然存在中和抗體，缺失疫苗的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，它比僅有抗原成分含量不高和主要抗原決定簇丟但其排毒期卻可持續(xù)數(shù)年。因此許多國

6、家TK單基因缺失的疫苗更優(yōu)越。由于TK基因失，且由于不能給免疫系統(tǒng)提供內(nèi)源性蛋已禁止使用弱毒疫苗，取而代之的則是以屬于酶蛋白基因，在體內(nèi)不能產(chǎn)生其相應(yīng)白抗原，而不能誘生細(xì)胞毒T細(xì)胞反應(yīng)缺失TK基因的基因缺失疫苗。的抗體，因此原來的TK單基因缺失株只能（CTL），少量接種往往不能誘生足夠的免采用核酸雜交，限制性內(nèi)切酶指紋圖譜，疫反應(yīng)，因而具有免疫效力不佳、接種劑3基因缺失疫苗空斑放射自顯影同野毒株相區(qū)別。若要用量大的缺點(diǎn)，常常需要多次重復(fù)接種，給偽狂犬病毒基因缺失疫苗的研制始血清學(xué)方法區(qū)別開免疫接種豬與自然感防疫工作帶來麻煩。于八十年代初期，即是利用基因工程技術(shù)染豬，就必須缺失相應(yīng)的糖蛋

7、白基因。據(jù)在PRV基因組中插入或缺失一段序列致使此，偽狂犬病毒雙基因缺失疫苗株除了在2自然弱毒疫苗PRV的某些基因不能表達(dá)，從而致弱PRV，TK基因引入了1個(gè)缺失外，在編碼非必需202005.04主題策劃　■糖蛋白的基因內(nèi)引入了1個(gè)新的缺失，或口的同類疫苗，免疫效果相近，但在抗?jié)撊静⒊蔀楝F(xiàn)實(shí)。但值得注意的是，偽狂再插入1個(gè)報(bào)告基因，這樣得到的突變株伏感染方面效果更獨(dú)特；成本大大低于進(jìn)犬病毒屬于潛伏感染力很高的病毒，因此就不能產(chǎn)生被缺失的糖蛋白