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1、免疫膠體金技術(shù)Immunecolloidalgoldtechnique膠體金標(biāo)記技術(shù)的相關(guān)定義免疫膠體金技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金標(biāo)記實質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。膠體金技術(shù)的發(fā)展DevelopmentofImmunecolloidalgoldtechnique1939-----雛形Kausche等把煙草花葉病毒吸附到金顆粒上在電子顯微鏡下觀察金離子呈高電子密度。1971------作為標(biāo)記物應(yīng)用于免疫組織化學(xué)研究Faulk等首先將兔抗沙門菌抗血清與膠體金顆粒結(jié)
2、合，用直接免疫細胞化學(xué)技術(shù)檢測沙門菌的表面抗原。1974------實現(xiàn)間接免疫金染色法Romano將膠體金標(biāo)記到馬抗人的IgG上，實現(xiàn)了間接免疫金染色法膠體金技術(shù)的種類及優(yōu)點快速免疫金滲濾法(immuogoldfiltrationassay,IGFA)即穿流式(flowthrough)的固相膜免疫測定。主要由兩部分組成：膜滲濾裝置和標(biāo)記結(jié)合物。前者為一塑料小盒，其中填滿吸水性物質(zhì)，面上緊貼放置一片吸附有抗體(以雙抗體夾心法測抗原為例)的硝酸纖維膜，標(biāo)記結(jié)合物為免疫金。A：金標(biāo)記抗體B：標(biāo)本中的抗原C：包被抗體D：NC膜E：吸水材料F
3、：塑料盒免疫層析法(immunochromatogra-phy，ICA)是繼IGFA之后發(fā)展起來的另一種固相膜免疫測定，與IGFA利用微局限性膜的過濾性能不同，免疫層析法中滴加在膜一端的樣品溶液受膜的毛細管作用(基于層析作用的橫流（lateralflow）)向另一端移動。移動過程中被分析物與固定在膜上某一區(qū)域的受體(抗原或者抗體)結(jié)合而被固相化，無關(guān)物質(zhì)則越過該區(qū)域而被分離，然后通過標(biāo)記物顯色來判定試驗結(jié)果，以膠體金為標(biāo)記物的實驗稱為膠體金免疫層析試驗。免疫膠體金技術(shù)的特點優(yōu)點：檢測方法簡單而快速，數(shù)分鐘即可得出結(jié)果；不需儀器設(shè)備，操
4、作人員不需特殊訓(xùn)練；試劑穩(wěn)定，適用于單份測定；無污染。GICA的特點是單一試劑，一步操作。小型實驗室即有條件開發(fā)生產(chǎn)。干燥包裝的試劑可在室溫保存一年以上。成為目前“病人身邊檢驗”（point-of-caretesting，POCT）中廣為應(yīng)用的方法。最近由于原料的精選和制作工藝的改進，已能制備出可用于定量測定的GICA試劑。Roche公司生產(chǎn)的用于急性心肌梗死診斷的肌鈣蛋白和肌紅蛋白的GICA試劑和匹配的簡便測讀器CardiacReader，其精密度和準(zhǔn)確性均符合定量測定要求。不足：金免疫測定中應(yīng)用的是單份試劑，難于進行質(zhì)量控制。即使
5、是同一批生產(chǎn)的試劑，也很難保證每個試劑的同一性。因此金免疫測定一般只能用于定性試驗。其定量檢測和靈敏度的提高還有賴于新原料和新材料的開發(fā)與應(yīng)用。ColloidalGoldSynthesisSolutioncolorvariesextensivelywithparticlesizeUsuallyadeepred,butalsodarkbrown/purpletolightorange/yellowColloidsizecanbecontrolledbyAu:CitrateratiosAnywherebetween1nm-100nm+Ci
6、trateiseasilysubstitutedbyothermoreAu-philicmolecules(i.ethiols)H2O,100OCH2AuCl4Cit-Cit-Cit-Cit-Turkevich,et.al.DiscussionsFaradaySoc.1951,No.1155-75.ProcedureofColloidalGoldSynthesisAdd100mLof1.0%HAuCl4toa200mLErlenmeyerflaskonastirringhotplate.Addamagneticstirbarandbr
7、ingthesolutiontoaboilTotheboilingsolution,add1.5mLofa1%solutionoftrisodiumcitratedihydrate,Na3C6H5O7.2H2OStopheatingwhenadeepredcolorisobtained.Synthesisandpropertiesofdifferentparticlesize膠體金粒徑(nm)1%檸檬酸三鈉加入量(ml)膠體金特性呈色λmax162橙色518nm24.51.5橙色522nm411紅色525nm71.50.7紫紅535n
8、mTEMImagesofColloidalAuAverageparticlesize~17nmGoodgoldcolloidsandbad(unstable)goldcolloids.劣質(zhì)金外形不均一，且非球形，有凝集現(xiàn)
