沙門氏菌檢驗(yàn).ppt

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1、沙門氏菌檢驗(yàn)革蘭氏陰性桿菌前增菌增菌分離生化試驗(yàn)多價(jià)血清凝集試驗(yàn)革蘭氏染色前增菌固體樣品：25g（電子天平）液體樣品：25mL（25mL吸量管）+225mL緩沖蛋白胨水（BPW，量筒），混勻。于36℃±1℃培養(yǎng)8~18h注意：液體樣品先用無菌NaOH或HCl調(diào)節(jié)PH至7.0。稀釋瓶或具塞廣口瓶增菌取陽性前增菌液1mL+10mLTTB1mL+10mLSC42℃±1℃18~24h培養(yǎng)36℃±1℃18~24h培養(yǎng)科瑪嘉顯色平板BS瓊脂平板分離取陽性TTB試管和陽性SC試管陽性TTB1環(huán)BS平板，劃線36℃±1℃40

2、~48h培養(yǎng)1環(huán)顯色平板，劃線36℃±1℃18~24h培養(yǎng)陽性SC1環(huán)BS平板，劃線36℃±1℃40~48h培養(yǎng)1環(huán)顯色平板，劃線36℃±1℃18~24h培養(yǎng)平板劃線示意圖開始處開始處沙門氏菌在科瑪嘉顯色平板上的菌落特征：紫紅色菌落沙門氏菌在BS瓊脂平板上的菌落特征：黑色有金屬光澤，棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色，有些菌落呈綠色，周圍培養(yǎng)基不變色。生化試驗(yàn)在陽性BS或顯色平板上挑取可疑菌落。三糖鐵斜面：先劃線，后穿刺接種賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂平板劃線尿素斜面：先劃線，后穿刺連做，接種針不要

3、滅菌36℃±1℃18~24h培養(yǎng)滅菌后，取1環(huán)，加入胰蛋白胨水培養(yǎng)取陽性胰蛋白胨水（放陽性物品處）靛基質(zhì)試劑用滴管取1~2滴加入陽性胰蛋白胨水中。結(jié)果：多數(shù)為陰性三糖鐵斜面培養(yǎng)結(jié)果：底層（+）、產(chǎn)H2S（黑色）、產(chǎn)氣（有氣泡）或不產(chǎn)氣紅色：產(chǎn)堿黃色：產(chǎn)酸黑色：產(chǎn)硫化氫尿素斜面培養(yǎng)結(jié)果：顏色變黃（產(chǎn)酸）尿素斜面三糖鐵斜面培養(yǎng)結(jié)果：底層（+）、產(chǎn)H2S（黑色）、產(chǎn)氣（有氣泡）或不產(chǎn)氣賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)結(jié)果：顏色變化（加深），為陽性尿素斜面培養(yǎng)結(jié)果：顏色變黃（產(chǎn)酸）革蘭氏染色結(jié)果：G-（紅色，無芽孢，桿菌）凝集試驗(yàn)②

4、從有典型沙門氏菌三糖鐵斜面上用接種環(huán)取1環(huán)玻片用記號(hào)筆在玻片中間畫條線①滴1~2滴滅菌生理鹽水①滴1~2滴沙門氏菌多價(jià)血清結(jié)果：沙門氏菌多價(jià)血清：凝固滅菌生理鹽水：不凝固另：從有典型沙門氏菌三糖鐵斜面取1環(huán)，染色。在無菌室中固定，到微生物實(shí)訓(xùn)室染色涂片——火焰固定——結(jié)晶紫初染——水洗——碘液媒染——乙醇脫色——水洗——吸干——番紅或沙磺復(fù)染——水洗——干燥——鏡檢染色涂片：在載玻片中央滴一滴生理鹽水，用無菌操作法挑取菌種于生理鹽水中，調(diào)勻并涂成薄膜。注意：生理鹽水不宜過多；涂片必須均勻?；鹧婀潭ǎ狠d玻片通過

5、火焰1~2次固定，不可過熱，以載玻片不燙手背為宜。結(jié)晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜上加結(jié)晶紫1滴，染色1min。水洗：用自來水沖洗至沖下的水無色為止。碘液媒染：加碘液媒染1min，然后用水沖洗至沖下的水呈無色為止。乙醇脫色：用吸水紙將載玻片上的水吸凈，用95%的乙醇滴于涂片薄膜上，滴洗至流出的乙醇不出現(xiàn)紫色為止，大約需要20~30s。立即用自來水沖洗乙醇約30s，用吸水紙吸干水分。番紅或沙磺復(fù)染：在涂片薄膜上滴加番紅1滴，染色1~2min。水洗：用水沖洗至沖下的水呈無色為止。干燥：于室溫下自然干燥。觀察

6、：干燥后，于涂片薄膜上滴香柏油1滴，置油鏡下觀察。結(jié)果:革蘭氏陽性菌——紫色；革蘭氏陰性菌——紅色。謝謝！