蘇云金芽孢桿菌的分離及鑒定

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1、蘇云金芽孢桿菌的分離及鑒定09級園林工程系生物技術(shù)及應(yīng)用班級(制作人—王玨指導(dǎo)教師—韓磊)內(nèi)容提要本論文描述了蘇云金芽孢桿菌的選擇性培養(yǎng)、分離以及鑒定的過程,從而熟悉了滅菌、接種等無菌操作技術(shù)，掌握了鑒定菌種的不同方法以及了解到了蘇云金芽孢桿菌在生產(chǎn)上的應(yīng)用和發(fā)展前景前景。關(guān)鍵詞蘇云金芽孢桿菌;選擇性培養(yǎng);生化鑒定；明膠酶；明膠的液化；精氨酸脫羧酶；尿素酶1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1玻璃器皿燒杯；三角瓶；量筒；玻璃棒；培養(yǎng)皿；試管；移液管；涂布棒；酒精燈；膠頭滴管等1.1.2實(shí)驗(yàn)儀器超凈工作臺；光照培養(yǎng)箱；水浴鍋；搖床；電子天平等1.1.3其他用具研缽；

2、紗布；吸耳球；八層紗布；剪刀；棉塞；pH試紙；膠頭滴管；牛皮紙；麻線；噴壺等1.1.4實(shí)驗(yàn)材料土壤表層土樣；葉片；蘇云金芽孢桿菌菌粉1.2方法與步驟1.2.1選擇性培養(yǎng)及擴(kuò)大培養(yǎng)1.2.1.1滅菌前準(zhǔn)備1)PBA培養(yǎng)基的制備PBA培養(yǎng)基配方（1L）配方蛋白胨牛肉膏醋酸鈉PH用量10g5g34g7.0-7.2配置750mL的PBA搖瓶培養(yǎng)基后分裝于三個(gè)大三角瓶內(nèi)，隨后用棉塞及牛皮紙封口包扎；以備滅菌（121℃,20min）。注（制備的培養(yǎng)基中有500mL中不含有醋酸鈉）2）滅菌器材的準(zhǔn)備將需要滅菌的三角瓶、紗布、擱置架分別包扎后同培養(yǎng)基利用手提式高壓滅菌器進(jìn)行滅菌

3、（121℃,20min）。1.2.1.2滅菌1、注水：往滅菌鍋內(nèi)注入適量的蒸餾水；2、預(yù)熱：放入需滅菌的器材和培養(yǎng)基之前先預(yù)熱十分鐘；3、加熱升溫過程：將需要滅菌器的材放入滅菌鍋內(nèi)→蓋好滅菌鍋的頂蓋→打開放氣閥→接通電源進(jìn)行升溫、升壓→待到有大量熱氣從放氣閥冒出時(shí)關(guān)掉放氣閥；此后是升壓的過程；4、升壓、降壓過程：開始升溫后壓強(qiáng)隨之升高，待到壓強(qiáng)為0.05mpa時(shí)關(guān)掉電源；此后為降壓過程，當(dāng)壓強(qiáng)降到0mpa時(shí)打開放氣閥放氣。放完氣后關(guān)掉放氣閥接通電源，再次升溫、降溫后打開放氣閥放氣，放完氣之后關(guān)掉放氣閥接通電源；此后為升壓保壓的過程；5、升壓保壓過程：當(dāng)壓強(qiáng)從0m

4、pa升到1.1mpa時(shí)開始計(jì)時(shí)；當(dāng)壓強(qiáng)升到1.13mpa時(shí)關(guān)掉電源，待壓強(qiáng)降到約1.1mpa時(shí)再接通電源；再次升壓至1.13mpa時(shí)關(guān)掉電源開始降壓，當(dāng)降到1.1mpa時(shí)再接通電源然后開始升壓。重復(fù)上一步操作，使此過程保持20分鐘。此后為降壓出鍋過程；6、降壓出鍋過程：保壓20分鐘后關(guān)掉電源等待降壓至0mpa時(shí)打開放氣閥放氣；用抹布打開滅菌鍋的鍋蓋，然后將滅完菌的器具和培養(yǎng)基取出；1.2.1.3樣品的預(yù)處理三個(gè)小組分別取土壤表層土樣和植物葉片共5份→土壤研磨、葉片剪碎→每份樣品稱取5g→溶于適量的自來水中→搖勻→置于75℃的水浴鍋中保溫10min→靜置1.2.1

5、.4超凈工作臺的準(zhǔn)備接通電源后打開紫外燈，30分鐘后關(guān)掉紫外燈打開風(fēng)機(jī)約20分鐘；然后用肥皂洗手后進(jìn)行無菌操作。1.2.1.5無菌操作1）培養(yǎng)基的完善及分裝（對照試驗(yàn)）第二、三小組往各組的PBA培養(yǎng)基內(nèi)分別加放適量的青霉素和慶大霉素，隨后每40mL分裝到無菌的小三角瓶內(nèi)。注（待無菌的培養(yǎng)基稍冷后進(jìn)行操作；在無菌操作前要對超凈工作臺的臺面和手用75%酒精進(jìn)行表面滅菌。）2）接種各組將適量的樣液過濾液過濾到搖瓶培養(yǎng)基內(nèi)，然后在搖瓶外壁上標(biāo)明樣品名稱、接種時(shí)間及小組序號；最后將所有的搖瓶包扎好進(jìn)行培養(yǎng)。1.2.1.6培養(yǎng)在所有搖瓶的外壁上標(biāo)明樣品名稱、接種時(shí)間及小組號

6、，隨后將搖瓶置于200r、min的搖床上進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)24h后下?lián)u床并置于冰箱內(nèi)保存，等待菌種分離1.2.2菌種分離及純化1.2.2.1滅菌前準(zhǔn)備1)BP培養(yǎng)基的制備BP培養(yǎng)基配方（1L）配方牛肉膏蛋白胨氯化鈉瓊脂PH用量5g10g5g20g7.0-7.2配置900mL的BP固體培養(yǎng)基后分裝于三個(gè)大三角瓶內(nèi)，隨后用棉塞及牛皮紙封口包扎；以備滅菌（121℃,20min）。注（制備的培養(yǎng)基中有600mL不含氯化鈉）2）滅菌器材的準(zhǔn)備將需要滅菌的培養(yǎng)皿、涂布棒、移液管、紗布、擱置架分別包扎后同培養(yǎng)基利用手提式高壓滅菌器進(jìn)行滅菌（121℃,20min）。1.2.2.2滅

7、菌準(zhǔn)備就緒后利用手提式滅菌鍋進(jìn)行滅菌（121℃,20min）。1.2.2.3超凈工作臺的準(zhǔn)備接通電源后打開紫外燈，30分鐘后關(guān)掉紫外燈打開風(fēng)機(jī)約20分鐘；然后用肥皂洗手后進(jìn)行無菌操作。1.2.2.4無菌操作1）培養(yǎng)基的完善及分裝（對照試驗(yàn)）第二、三小組往各組的BP培養(yǎng)基內(nèi)分別加放適量的青霉素和慶大霉素，隨后每20mL傾注到無菌的培養(yǎng)皿內(nèi)。注（待無菌的培養(yǎng)基稍冷后進(jìn)行操作；在無菌操作前要對超凈工作臺的臺面和手用75%酒精進(jìn)行表面滅菌。）2）涂布接種平板培養(yǎng)基的凝固→用無菌的移液管從搖瓶內(nèi)吸取1-2mL的菌液→涂布平板1.2.2.5培養(yǎng)在所有平板的外壁上標(biāo)明樣品名稱

8、、接種時(shí)間及小組號，隨后