實驗 ABO血型鑒定.ppt

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1、實驗ABO血型鑒定效價測定親和力實驗一、ABO血型鑒定ABO血型抗體系IgM型，分子大，能在生理鹽水介質(zhì)中與相應(yīng)的抗原結(jié)合而發(fā)生凝集反應(yīng)。做ABO血型鑒定時，應(yīng)該以標(biāo)準(zhǔn)抗體鑒定紅細(xì)胞上的抗原，同時以標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞鑒定血清中的抗體，兩者符合才能做出正確判斷。（一）正定型用已知IgM類特異性血型抗體與被檢測紅細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中反應(yīng)，若出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，表明被檢測紅細(xì)胞膜上有相應(yīng)抗原，從而判斷血型。采集靜脈血制備5%的被檢測紅細(xì)胞生理鹽水懸液玻片法試管法觀察結(jié)果，有無凝集或者溶血（顯微鏡）抗A抗B血型+-A-+B--O++AB（二）反定型用已知的標(biāo)準(zhǔn)A、B、O型紅細(xì)胞與被檢

2、測血清反應(yīng)，若被檢測血清與已知型別的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集，則證明被測定紅血清中存在與該紅細(xì)胞抗原相對應(yīng)的抗體，反之則沒有。分離血清分別加5%的三種標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞生理鹽水懸液1d，觀察有無凝集或者溶血（顯微鏡）。A型紅細(xì)胞B型紅細(xì)胞O型紅細(xì)胞血型-+-A+--B++-O---AB嚴(yán)格標(biāo)記，防止混淆。觀察時，應(yīng)該先肉眼觀察，不確定則用顯微鏡低倍鏡觀察有無凝集。防止出現(xiàn)冷凝集或者某些疾病干擾引起的假凝集。二、血型抗體效價測定效價是指血清中含某種抗體的濃度，將被檢測抗血清做倍比稀釋后，加入一定量的抗原紅細(xì)胞，觀察凝集程度，以最大稀釋倍數(shù)能與相應(yīng)紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集的試管稀釋倍

3、數(shù)之倒數(shù)定為效價。10支小試管，每管加0.1ml生理鹽水，再第1管中加入0.1ml血清，混勻后吸取0.1ml到第2管，以此類推，做倍比稀釋。稀釋倍數(shù)為1：2，1：4，1：8等。加相應(yīng)的2%的紅細(xì)胞生理鹽水懸液0.1ml，混勻，最終稀釋倍數(shù)為1：4，1；8，1；16等等。15min后離心后觀察結(jié)果，先觀察上層有無溶血，再輕輕渾勻觀察。以出現(xiàn)凝集的最高稀釋倍數(shù)的倒數(shù)定為該抗體效價。一般抗A、抗B效價在1：128以上。三、親和力實驗親和力是指血清中的抗體與相應(yīng)紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集的速度和強度。被檢測血清0.05ml于玻片上，再吸取10%相應(yīng)紅細(xì)胞生理鹽水懸液0.1ml

4、于被測定血清的近旁，用玻片混合血清和紅細(xì)胞，立即看表，并緩緩轉(zhuǎn)動玻片，要求15s內(nèi)出現(xiàn)凝集，3min凝快大小不小于1mm2。