大腸埃希氏菌.ppt

《大腸埃希氏菌.ppt》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、大腸埃希氏菌藥典法生化檢查潘慶玲大腸埃希菌檢查大腸埃希菌（Escherichiacoil）即大腸桿菌，為腸桿菌科埃希菌屬的模式種。大腸埃希菌是人和溫血?jiǎng)游锬c道內(nèi)的棲居菌，隨糞便排出體外。在藥品中檢出大腸埃希菌，表明該樣品受到人和溫血?jiǎng)游锛S便的污染，即可能是污染腸道病原體。大腸埃希菌除普通大腸埃希菌外，還有致病性大腸埃希菌，可引起嬰幼兒、成人爆發(fā)性腹瀉。為了保證人體健康，口服給藥制劑必須檢查大腸埃希菌。標(biāo)準(zhǔn)《中國藥典》（2010年版）二部口服給藥制劑細(xì)菌總數(shù)每1ml不得過100cfu霉菌和酵母菌總數(shù)每1ml不得過100cfu大腸埃希菌總數(shù)不得檢出備料單（增菌培養(yǎng)）序號品名規(guī)格數(shù)量備注1錐形瓶25

2、0ml42刻度吸管10ml23刻度吸管1ml14燒杯250ml15量筒100ml16膽鹽乳糖培養(yǎng)基100ml3裝錐形瓶7pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液150ml1裝錐形瓶滅菌參數(shù)：121℃、20min操作過程樣品10ml90ml供試液稀釋液陰樣陽10ml10ml10ml菌懸液1mlBL培養(yǎng)基BL培養(yǎng)基BL培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度：36℃培養(yǎng)時(shí)間：18~24h（必要時(shí)可延長至48h）備料單（快速生化試驗(yàn)）序號品名規(guī)格數(shù)量備注1刻度吸管1ml32試管中43MUG培養(yǎng)基5ml4分裝到試管中4靛基質(zhì)————滅菌參數(shù)：115℃、20min操作過程陰樣陽陰樣陽本底靛基質(zhì)試驗(yàn)紫外熒光0.2ml0.2ml0.2ml

3、培養(yǎng)溫度：36±1℃培養(yǎng)時(shí)間：18~24h備料單（分離培養(yǎng)）序號品名規(guī)格數(shù)量備注1EMB或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基60ml1置皿2平皿——3滅菌參數(shù)：121℃、15min操作過程陰樣陽EMB或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基接種環(huán)（四區(qū)劃線法）培養(yǎng)溫度：36±1℃培養(yǎng)時(shí)間：18~24h生化試驗(yàn)中MUG在紫外等下顯熒光的原理大腸埃希氏菌是指能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶分解ONPG使培養(yǎng)液呈黃色，能產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶分解MUG使培養(yǎng)液在波長366nm紫外光下產(chǎn)生熒光的細(xì)菌。BL培養(yǎng)基配方（每升）：胨20.0g提供碳氮源乳糖5.0g可發(fā)酵的糖類氯化鈉5.0g維持均衡的滲透壓磷酸氫二鉀4.0g緩沖劑磷酸二氫鉀1.3g去氧膽酸鈉/牛

4、膽鹽0.5g/2.0?g選擇性抑菌劑使用方法1、稱取本品35.8g，加入蒸餾水或去離子水1?L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，每瓶100mL，121℃滅菌20min，待冷至常溫后，備用。2、樣品的處理。略。3、取膽鹽乳糖增菌液3份，2份分別加入規(guī)定量的供試液，其中一份加入對照菌50～100個(gè)作陽性對照，第三份加入與供試液等量的稀釋液作陰性對照。4、將三角瓶放入30～35℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24h。必要時(shí)可延長至48h。5、觀察結(jié)果。陽性對照應(yīng)生長良好，陰性對照應(yīng)無菌生長。質(zhì)量控制：本品質(zhì)控菌株接種后，于36±1℃培養(yǎng)18～24h，培養(yǎng)結(jié)果肉湯呈混濁。MUG培養(yǎng)基配方（每升）：胰蛋白胨

5、20.0g提供碳氮源3號膽鹽1.5g抑制革蘭氏陽性菌乳糖5.0g可發(fā)酵的糖類磷酸氫二鉀4.0g緩沖劑磷酸二氫鉀1.5g氯化鈉5.0g維持均衡的滲透壓MUG0.05g使用方法1、稱取本品37.05g，加入蒸餾水或去離子水1?L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝于帶有小倒管的試管中，115℃高壓滅菌20min，待冷至常溫，備用。2、將總大腸菌群多管發(fā)酵法初發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)氣的管進(jìn)行大腸埃希氏菌檢測。用燒灼滅菌的金屬接種環(huán)或無菌棉簽將上述試管中液體接種到EC-MUG肉湯管中。3、將已接種的EC-MUG管在培養(yǎng)箱或恒溫水浴中44.5±0.5℃培養(yǎng)24h±2h。如使用恒溫水浴，在接種30min內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，水浴箱

6、的液面應(yīng)高于EC-MUG肉湯液面。4、觀察結(jié)果：將培養(yǎng)基管置366nm紫外燈下約5cm處，以未接種培養(yǎng)物的EC-MUG培養(yǎng)基作空白對照，觀察有無藍(lán)白色熒光?？瞻讓φ展軕?yīng)無藍(lán)白色熒光，試驗(yàn)管出現(xiàn)藍(lán)白色熒光為陽性反應(yīng)。質(zhì)量控制：大腸埃希菌菌株接種后于36±1℃培養(yǎng)18~24h，結(jié)果產(chǎn)氣，紫外燈下顯熒光。EMB瓊脂培養(yǎng)基配方（每升）：胨10.0g提供氮源、維生素、氨牛肉浸出粉3.0g基酸和碳源氯化鈉5.0g維持均衡的滲透壓乳糖10.0g可發(fā)酵的糖類瓊脂14.0g培養(yǎng)基凝固劑曙紅鈉0.4g抑菌劑（革蘭氏陽性菌）亞甲藍(lán)0.065gpH指示劑在酸性條件下產(chǎn)生沉淀，形成紫黑色菌落或具黑色中心的外圍無色透明的

7、菌落。使用方法1、稱取本品42.5g，加入蒸餾水或去離子水1?L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min。2、待培養(yǎng)基冷至50℃左右，以無菌手續(xù)，傾注滅菌平皿，待凝固后，備用。3、將供試液劃線接種于平板上。4、將平板翻轉(zhuǎn)，放入恒溫培養(yǎng)箱中，30～35℃培養(yǎng)18～24h。5、觀察結(jié)果。質(zhì)量控制：本培養(yǎng)基傾注平皿待冷卻后呈紫色，可有細(xì)微沉淀。大腸埃希菌菌株接種后。36±1℃培養(yǎng)