腸道桿菌的分離鑒定(三).ppt

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1、腸道桿菌的分離鑒定(三)1、觀察雙糖含鐵培養(yǎng)基、靛基質(zhì)試驗(yàn)結(jié)果2、血清學(xué)鑒定:玻片法3、尿素酶試驗(yàn)4、肥達(dá)氏反應(yīng)試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)七材料:指示劑:柯氏(kovac)試劑(靛基質(zhì)試劑)雙糖含鐵培養(yǎng)基、靛基質(zhì)試驗(yàn)結(jié)果乳糖葡萄糖動(dòng)力硫化氫尿素酶大腸桿菌⊕⊕+--痢疾桿菌-+---傷寒桿菌-+++/--副傷寒桿菌-⊕++-變形桿菌-⊕+++實(shí)驗(yàn)材料(1)待檢菌的培養(yǎng)物。(2)沙門氏菌屬A—E群多價(jià)O血清。(3)志賀氏菌屬多價(jià)血清。(4)玻片、接種環(huán)、酒精燈、火柴、記號(hào)筆等。實(shí)驗(yàn)方法取可疑病原菌菌落的一部分與沙門氏菌屬A-E群多價(jià)O血清

2、和志賀氏菌屬多價(jià)血清分別進(jìn)行玻片凝集反應(yīng),觀察是否凝集。血清學(xué)鑒定:玻片法具體方法如下:(1)取清潔玻片一張,用蠟筆劃為三格,并注明號(hào)碼。按無(wú)菌操作方法用接種環(huán)于第一格內(nèi)加沙門氏菌屬A-E群多價(jià)O血清l~2滴,第二格內(nèi)加志賀氏菌屬多價(jià)血清1-2滴,第三格內(nèi)加鹽水1—2滴。(2)無(wú)菌操作下用接種環(huán)分別取少許可疑病原菌菌落與血清或鹽水混合成均勻乳狀(注意:取菌量不宜過(guò)多,使懸液呈輕度乳濁即可)。(3)輕輕搖動(dòng)玻片,經(jīng)1-2min后觀察結(jié)果。如待檢菌與沙門氏菌屬A-E群多價(jià)O血清發(fā)生凝集,則該菌為沙門氏菌屬;如待檢菌與志賀

3、氏菌屬多價(jià)血清發(fā)生凝集,則該菌為志賀氏菌屬。方法:將可疑細(xì)菌接種于尿素培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)18~24h。尿素酶試驗(yàn)肥達(dá)氏反應(yīng)原理:用已知傷寒沙門菌O、H抗原,以及引起副傷寒的副傷寒沙門菌H抗原與受檢血清作定量凝集試驗(yàn),測(cè)定受檢血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及其效價(jià)的試驗(yàn)。作為臨床上診斷傷寒和副傷寒的參考。實(shí)驗(yàn)材料(1)待測(cè)血清(1:10),傷寒桿菌O、H菌液,甲型副傷寒桿菌(PA)和乙型副傷寒桿菌(PB)H菌液,生理鹽水。(2)小試管,吸管,試管架,吸耳球(或橡皮乳頭),水浴箱,記號(hào)筆等。方法:①在試管架上放4排試管,每排10支

4、,做好標(biāo)記。②每排每支試管各加入0.5ml生理鹽水。③每排第1管中分別加入待測(cè)血清0.5ml。混勻后用吸管吸取0.5ml混合液加到第2管內(nèi)。混勻后再?gòu)闹形?.5ml液體到第3管中,如此重復(fù)直至第9管。第9管稀釋完后吸取0.5ml混合液棄去。第10管不加待測(cè)血清作陰性對(duì)照。每一排試管均重復(fù)上述步驟。④在第1排每個(gè)試管中加入傷寒桿菌“O”抗原0.5ml,第2排,第3排和第4排則每管分別加入0.5ml傷寒桿菌、甲型副傷寒桿菌、乙型副傷寒桿菌的“H”抗原。⑤將所有的試管充分振蕩,使其混勻,置37℃水浴24小時(shí),取出觀察結(jié)果

5、。

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