牛乳中酪蛋白的制備.ppt

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1、實驗四牛乳中酪蛋白的制備目的要求學習從牛乳中分離純化酪蛋白的原理和方法。實驗原理牛乳中主要的蛋白質(zhì)是酪蛋白，含量約為35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白質(zhì)的混合物，等電點為4.7。利用等電點時溶解度最低的原理，將牛乳的pH調(diào)至4.7時，酪蛋白就沉淀出來。用乙醇洗滌沉淀物，乙醚除去脂類雜質(zhì)后便可得到純的酪蛋白。水→洗滌水溶蛋白、雜質(zhì)乙醇→脫水乙醇：乙醚→過渡洗滌乙醚→脫脂試劑和器材試劑：95%乙醇；無水乙醚乙醇—乙醚混合液(V/V=1∶1)自己配制5+5共10毫升0.2mol/LpH4.7醋酸—醋酸鈉緩沖液;冰乙酸材料純牛奶(蒙牛)器材：水浴鍋；低速離心機1

2、．將20mL牛奶加熱至40℃。在攪拌下慢慢加入預熱至40℃、pH4.7醋酸緩沖液20mL。用精密試紙調(diào)pH值至4.7。2.將上述懸浮液冷卻至室溫。轉(zhuǎn)移至4個離心管中離心10min(3000r/min)棄去上清液，得酪蛋白粗制品。3．用4毫升/管水洗沉淀，合并在兩個離心管中，離心5min(3000r/min)，棄去上清液；再水洗滌一次。操作方法4．用95%乙醇洗沉淀1次，離心5min(3000r/min)，棄去上清液。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀1次。最后用乙醚洗沉淀1次，各離心5min(3000r/min)。洗滌試劑用量4毫升/管5．將沉淀攤開在培養(yǎng)皿上，

3、電吹風吹干；得酪蛋白純品。6．準確稱重，計算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%）,并和理論含量為3.5g/100mL牛乳相比較，求出實際得率。離心注意事項：1.樣品倒入玻璃離心管不能太滿；2.離心前玻璃離心管（套上塑料管套）放在天平上平衡好；3.離心機中對稱放置；4.接通電源前確認速度旋鈕是否歸零，調(diào)節(jié)定時旋鈕設(shè)定時間，按開始鍵開始離心，緩慢調(diào)節(jié)速度至實際需要速度。5.等到離心機完全停止后，機蓋取出離心管。1．制備高產(chǎn)率純酪蛋白的關(guān)鍵是什么？思考題