細(xì)胞凝集反應(yīng).doc

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1、生命科學(xué)學(xué)院LifeScienceCollege細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告姓名：柳偉雄班級(jí)：2013級(jí)生科一班學(xué)號(hào)：201300140062同組者：曾瑋璠山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告2015年4月19日姓名：柳偉雄系年級(jí)：生科一班2013級(jí)同組者：曾瑋璠科目：細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)題目：細(xì)胞凝集反應(yīng)一、目的和要求1、了解細(xì)胞的表面結(jié)構(gòu)。2、掌握細(xì)胞凝集的原理。3、掌握細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)的操作方法。4、掌握普通光學(xué)顯微鏡的使用方法。二、原理1、在細(xì)胞表面，組成細(xì)胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖鏈，形成細(xì)胞外被（糖萼）。目前認(rèn)為，細(xì)胞間的聯(lián)系、細(xì)

2、胞的生長(zhǎng)和分化、腫瘤的發(fā)生與免疫反應(yīng)都與細(xì)胞表面的分枝狀糖分子有關(guān)。2、凝集素是一類含糖（少數(shù)例外）并能與糖專一結(jié)合的蛋白質(zhì)，即糖蛋白，它具有凝集細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的作用。凝集素能與細(xì)胞外被中的糖分子連接，在細(xì)胞間形成“橋”的作用，從而凝集細(xì)胞。凝集素引起的細(xì)胞凝集，其細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)沒(méi)有發(fā)生改變。與血液凝固中發(fā)生的復(fù)雜生化反應(yīng)完全不同。3、競(jìng)爭(zhēng)性抑制實(shí)驗(yàn)：凝集素能與不同的糖蛋白特異性結(jié)合，加入與凝集素互補(bǔ)的糖可以抑制細(xì)胞凝集。三、試劑和器材1、實(shí)驗(yàn)材料家兔（或2%家兔紅細(xì)胞懸液）、土豆塊莖（或由土豆塊莖制作

3、的可溶性土豆凝集素粗提取液）、PBS緩沖溶液（磷酸緩沖溶液）、檸檬酸鈉溶液、0.9%的氯化鈉溶液（生理鹽水）2、實(shí)驗(yàn)器材5ml注射器、酒精棉球、雙凹片、載玻片、普通光學(xué)顯微鏡、托盤天平、滴管、離心管四、實(shí)驗(yàn)步驟1、2%家兔紅細(xì)胞懸液制備：以無(wú)菌方法抽取家兔耳緣靜脈血液1ml（5ml注射器中先吸取3ml檸檬酸鈉溶液），用0.9%的氯化鈉溶液洗5次，3000r/s離心5min，最后按沉淀的紅細(xì)胞體積用0.9%的氯化鈉溶液配成2%的紅細(xì)胞懸液。2、土豆凝集素制備：稱取去皮土豆塊莖2g，切成薄片，加10mlPB

4、S緩沖液，浸泡2h，浸出粗提液中含有可溶性土豆凝集素。3、細(xì)胞凝集反應(yīng)：雙凹片土左側(cè)滴土豆凝集素1滴，2%家兔紅細(xì)胞懸液1滴；右側(cè)滴PBS緩沖液1滴，2%家兔紅細(xì)胞懸液1滴。在雙凹片上混勻，搖動(dòng)。4、低倍鏡下觀察。山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告2015年4月19日姓名：柳偉雄系年級(jí)：生科一班2013級(jí)同組者：曾瑋璠科目：細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)題目：細(xì)胞凝集反應(yīng)五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、實(shí)驗(yàn)結(jié)論所加試劑土豆凝集素1滴，2%家兔紅細(xì)胞懸液1滴PBS緩沖液1滴，2%家兔紅細(xì)胞懸液1滴實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象發(fā)生了細(xì)胞凝集反應(yīng)未發(fā)生細(xì)胞凝集反應(yīng)2、實(shí)驗(yàn)照片加

5、入土豆凝集素的紅細(xì)胞加入pbs緩沖液的紅細(xì)胞山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告2015年4月19日姓名：柳偉雄系年級(jí)：生科一班2013級(jí)同組者：曾瑋璠科目：細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)題目：細(xì)胞凝集反應(yīng)加入土豆凝集素的紅細(xì)胞5min加入pbs緩沖液的紅細(xì)胞5min加入土豆凝集素的紅細(xì)胞10min加入pbs緩沖液的紅細(xì)胞10min②、低倍鏡觀察（10×4）山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告2015年4月19日姓名：柳偉雄系年級(jí)：生科一班2013級(jí)同組者：曾瑋璠科目：細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)題目：細(xì)胞凝集反應(yīng)實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組加入土豆凝集素的紅細(xì)胞10min加入pbs緩沖

6、液的紅細(xì)胞10min六、注意事項(xiàng)1、在使用雙凹片的過(guò)程中因操作不熟練，經(jīng)常造成兩個(gè)孔中的液體混合。在使用雙凹片時(shí)要注意搖動(dòng)的技巧，不可前后或左右單一地?fù)u動(dòng)，應(yīng)該一手固定，一手成環(huán)形方向搖動(dòng)，使凹槽內(nèi)的液體轉(zhuǎn)動(dòng)起來(lái)。