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《蘇云金芽胞桿菌HD12菌株中cry基因的表達(dá)調(diào)控.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
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3、Universitycode：10223Classifiedcode：Q93Graduatenumber：XS139006Confidentialdegree：PublicHeilongjiangBayiAgriculturalUniversityMasterDissertationRegulationandExpressionofcrygenesinBacillusthuringiensisHD12Postgraduate：SongZhiruSupervisor：ProfessorSunDongmeiProfessorSongF
4、upingMajor：MicrobiologyMicrobialResourcesandResearchdirection：UtilizationCollegeofLifeScienceCollege：andTechnologyDaqingChinaJune,2016摘要蘇云金芽胞桿菌（Bacillusthuringiensis，簡(jiǎn)稱Bt）是一種廣泛分布于自然界的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。其在形成芽胞的同時(shí)會(huì)產(chǎn)生由殺蟲蛋白組成的伴胞晶體，主要由cry和cyt基因編碼。在目前的應(yīng)用中，Bt菌劑存在著毒力有限、殺蟲譜較專一、害蟲容易產(chǎn)生抗性等問(wèn)題
5、。在遺傳工程菌的構(gòu)建過(guò)程中，多種殺蟲基因的協(xié)同表達(dá)十分重要。本實(shí)驗(yàn)室B．thuringiensissubsp.morrisonistrainHD12菌株含有多個(gè)殺蟲蛋白，主要對(duì)鱗翅目害蟲具有毒性，前期的二代測(cè)序獲得基因組序列，分析其發(fā)現(xiàn)含有8個(gè)cry基因，符合多基因表達(dá)調(diào)控的研究。本研究利用蔗糖梯度離心法純化HD12菌株晶體蛋白，通過(guò)SDS-PAGE和LC-MS/MS對(duì)晶體蛋白進(jìn)行鑒定，確定HD12晶體中含有Cry1Da、Cry1Ae、Cry1Bb、Cry1Fb、Cry1Ja五個(gè)蛋白。同時(shí)通過(guò)在不同遺傳背景的菌株中檢測(cè)cry1Da、
6、cry1Ae、cry1Bb、cry1Fb、cry1Ja啟動(dòng)子的β-半乳糖苷酶活性，確定cry1Da基因的轉(zhuǎn)錄是受SigE控制，其它的四個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄是受SigE、SigK控制。其中cry1Ja和cry1Fb基因啟動(dòng)子活性是最高的。選取cry1Ja和cry1Fb基因啟動(dòng)子來(lái)分別指導(dǎo)Cry1Ac和Cry2Ab蛋白表達(dá)。通過(guò)SDS-PAGE分析和質(zhì)譜鑒定確定cry1Ja、cry1Fb基因啟動(dòng)子均可指導(dǎo)Cry1Ac、Cry2Ab蛋白正確表達(dá)。成功構(gòu)建了具有相同轉(zhuǎn)錄機(jī)制的兩個(gè)不同的啟動(dòng)子指導(dǎo)多個(gè)外源cry基因的表達(dá)菌株。本研究確定了相同轉(zhuǎn)錄機(jī)制
7、的啟動(dòng)子能夠直接指導(dǎo)不同的cry基因在一個(gè)菌株中表達(dá)。這對(duì)克服當(dāng)前Bt殺蟲劑應(yīng)用限制，構(gòu)建多基因表達(dá)的菌株具有重要價(jià)值。為Bt菌株中表達(dá)多種依賴相同調(diào)控機(jī)制的cry基因提供了新思路。關(guān)鍵詞：蘇云金芽胞桿菌；cry基因；cry基因啟動(dòng)子；表達(dá)菌株IAbstractBacillusthuringiensis(Bt)isaGram-positivebacteriumthatwidelyspreadinnature.Itcanbeproducetheparasporalcrystalwhichconsistofinsecticidalpro
8、teinsduringsporulation.Theinsecticidalcrystalproteinisencodedbycrygenesorcytgenes.TheapplicationofB.thuringiensispest
