馬氏珠母貝collagen Ⅵ(COLⅥ)基因的克隆和功能研究.pdf

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6、VI蛋白。為了探究COLVI在馬氏珠母貝貝殼形成中的作用，本實驗運(yùn)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(RACE)獲得COLVI基因的cDNA全長，利用熒光定量PCR技術(shù)檢測基因的表達(dá)量分布，并采用原位雜交技術(shù)對COLVI進(jìn)行精確定位。通過RNAi技術(shù)促使基因表達(dá)沉默，探究COLVI對貝殼結(jié)晶的影響。并利用原核表達(dá)技術(shù)獲得了PmCOLVIA4-1的重組蛋白。1.本實驗成功克隆得到COLVI基因PmCOLVIA4-1、PmCOLVIA6-1、PmCOLVIA6-2的cDNA全長。PmCOLVIA4-1序列全長3136bp，其中開放閱讀框（ORF）長2841bp，編

7、碼946個氨基酸，5'非翻譯區(qū)（5'UTR）長93bp，3'非翻譯區(qū)（3'UTR）長202bp。PmCOLVIA6-1序列全長2100bp，其中開放閱讀框（ORF）長1875bp，編碼624個氨基酸，5'非翻譯區(qū)（5'UTR）長56bp，3'非翻譯區(qū)（3'UTR）長169bp。PmCOLVIA6-2序列全長2192bp，其中開放閱讀框（ORF）長1941bp，編碼646個氨基酸，5'非翻譯區(qū)（5'UTR）長41bp，3'非翻譯區(qū)（3'UTR）長210bp。并驗證了PmCOLVIA3、PmCO