血凝和血凝抑制.ppt

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1、血凝和血凝抑制試驗(yàn)一、試驗(yàn)?zāi)康模毖囼?yàn)：滴定病毒的血凝效價(jià)(病毒的凝集價(jià))，采用一定的病毒量，通常采用4個(gè)血凝單位。２血凝抑制試驗(yàn)：應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)病毒液測(cè)定血清中的相應(yīng)抗體或應(yīng)用特異性抗體鑒定新分離的血凝性病毒．３檢測(cè)雞群有無(wú)病毒感染和監(jiān)測(cè)雞的免疫狀態(tài)。掌握血凝和血凝抑制試驗(yàn)的原理和操作方法，能夠正確判定試驗(yàn)結(jié)果二、血凝試驗(yàn)(hemagglutinationtest)原理病毒粒子上的血凝素蛋白與紅細(xì)胞特定表面受體相結(jié)合，引起特異性凝集?！F(xiàn)象：有些病毒可凝集某些動(dòng)物（如雞、鵝、豚鼠、綿羊）和人的紅細(xì)胞。HA試驗(yàn)的原理示意圖用途：1確定病毒的存在；2測(cè)定病毒

2、的血凝價(jià)血凝價(jià)：能使一定量紅細(xì)胞發(fā)生50%凝集的病毒最高稀釋度實(shí)驗(yàn)材料器材：96孔V型微量反應(yīng)板、微量移液器、槍頭試劑：1%雞紅細(xì)胞(采集健康雞血液，以阿氏液抗凝，用PBS洗滌3-5次，用PBS配成1%紅細(xì)胞懸液備用)。試驗(yàn)抗原、PBS緩沖液血凝實(shí)驗(yàn)步驟1.取96孔V型反應(yīng)板1塊置于水平實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，在第1排1-10孔內(nèi)加入25ulPBS緩沖液，第11孔不加。第12孔加25ulPBS緩沖液2.在第1孔內(nèi)加入血凝素25ul，混勻后吸出25ul加入第2孔內(nèi)，再混勻后吸出25ul加入第3孔內(nèi)，依次類推至第10孔時(shí)棄掉25ul。第12孔不加作陰性對(duì)照孔。3.在1-12孔

3、均加入25ul的生理鹽水。4.在每孔內(nèi)加入25ul1%的雞紅細(xì)胞懸液，震蕩，室溫靜止感作15-30min，每5min觀察一次結(jié)果。5.計(jì)算血凝效價(jià)，稀釋使成為四價(jià)備用．結(jié)果判定1.在各組對(duì)照均正確的情況下，按下列標(biāo)準(zhǔn)判定血凝反應(yīng)強(qiáng)度示意圖“4＋”紅細(xì)胞呈片狀凝集，均勻布滿孔底，邊緣有時(shí)不整齊或皺縮?！?＋”紅細(xì)胞呈片狀凝集，但面積略小于“4+”?！?＋”紅細(xì)胞呈片狀凝集，但有少許沉積孔底中部呈小圓點(diǎn)狀?！埃奔t細(xì)胞大部分沉于孔底中央，周圍有少量散在凝集顆粒?！埃奔t細(xì)胞均沉于孔底呈小圓點(diǎn)狀，邊緣整齊。2.對(duì)照孔正常的情況下，紅細(xì)胞凝集100%的稀釋度為判定血

4、凝價(jià)的終點(diǎn)。凡能使雞紅細(xì)胞完全凝集的病毒最高稀釋倍數(shù)為病毒的凝集價(jià)。血凝抑制試驗(yàn)步驟1.取96孔V型反應(yīng)板1塊置于水平實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，在第1排1-10孔內(nèi)加入25ulPBS緩沖液，第11孔不加。第12孔加25ulPBS緩沖液。2.在第1孔內(nèi)加入被檢血清25ul，混勻后吸出25ul加入第2孔內(nèi)，再混勻后吸出25ul加入第3孔內(nèi)，依次類推至第10孔時(shí)棄掉25ul。第12孔不加作陰性對(duì)照孔。3.在1-12孔內(nèi)均加入“四價(jià)”血凝素25ul，震蕩后，室溫靜止作用40min。4.在1-12孔內(nèi)均加入1%的雞紅細(xì)胞懸液25ul，震蕩，室溫30min。5.觀測(cè)結(jié)果，記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)．

5、血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果判定測(cè)定孔R(shí)BC沉于孔底中心，呈紐扣狀。(+)凝集（-）病毒對(duì)照孔：凝集RBC對(duì)照孔：無(wú)自凝血凝抑制試驗(yàn)效價(jià)：呈完全血凝抑制使的最高血清稀釋度。思考題1、病毒凝集紅細(xì)胞是不是一種特異的抗原體反應(yīng)？為什么？2、血凝抑制實(shí)驗(yàn)是不是特異的抗原抗體反應(yīng)?為什么？3、血凝試驗(yàn)中為什么要加補(bǔ)充液？4、為什么加病毒液和紅細(xì)胞懸液時(shí)要反向加？5、血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)中空白對(duì)照的意義？孔號(hào)1234567891011(+)12（-)HA稀釋度248163264128256、、、、棄PBS25252525252525252525x25血凝素25252525252

6、52525252525血凝素xPBS2525252525252525252525251%雞紅細(xì)胞252525252525252525252525結(jié)果預(yù)測(cè)++++++++++++++++++++++++++--++++_孔號(hào)1234567891011(+)12（-)HI稀釋度248163264128256、、、、棄PBS25252525252525252525X25待檢血清2525252525252525252525x4HA血凝素2525252525252525252525251%雞紅細(xì)胞252525252525252525252525結(jié)果預(yù)測(cè)-----+++

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