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1、主要內(nèi)容為什么要做核酸檢測(cè)？核酸是什么？怎樣進(jìn)行核酸檢測(cè)？市場(chǎng)狀況為什么要做核酸檢測(cè)？核酸檢測(cè)（基因檢測(cè)）現(xiàn)知人類的疾病都與基因有直接或間接的關(guān)系。醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室所要檢測(cè)和分析的核酸既包括人體本身的基因(DNA)以及反映基因轉(zhuǎn)錄水平的mRNA,也包括侵入人體的致病微生物等所攜帶的外源性基因(DNA/RNA)。傳統(tǒng)檢測(cè)試劑（酶免ELISA）技術(shù)特點(diǎn)：檢測(cè)目標(biāo)為蛋白,所檢測(cè)的主要是疾病所引發(fā)的人體抗體而不是病原體本身,是一種間接、滯后的檢測(cè)方式。易操作，成本低。固有不足：不能夠消除對(duì)“窗口期”標(biāo)本(抗體陰性,核酸陽(yáng)性)的漏檢難于檢測(cè)病原體的不同亞型及突變型不典型血清陽(yáng)轉(zhuǎn)對(duì)免疫逃避或
2、免疫沉寂的標(biāo)本產(chǎn)生漏檢核酸檢測(cè)顯著縮短窗口期:HIV窗口期縮短45%，HCV縮短89%，HBV縮短50%。提高靈敏度:理論上擴(kuò)增體系中單拷貝的模板也能被檢測(cè)出。特異性好:使用熒光探針技術(shù)的PCR檢測(cè)，幾乎沒有方法學(xué)的假陽(yáng)性。直接揭示病原體的存在對(duì)操作者及檢測(cè)環(huán)境的要求較高檢測(cè)成本相對(duì)較高輸血中可傳染病原體的“窗口期”病毒種類ELISA檢測(cè)項(xiàng)目窗口期HCV抗-HCV2.0/3.0EIA8-10周HIV抗-HIV-1/2EIAandHIV-1抗原EIA2-4周HBVHBVsAgEIAandHBVcAgEIA6-8周HTLV抗-HTLVI/IIEIA8-10周CMV抗-CMVEI
3、A3-5周窗口期檢測(cè)率國(guó)家或地區(qū)HBVHCVHIV加拿大1:153000(~1/15萬(wàn))1:2300000(~1/230萬(wàn))1:7800000(~1/780萬(wàn))法國(guó)1:640000(~1/64萬(wàn))1:10000000(~1/1000萬(wàn))1:3150000(~1/315萬(wàn))德國(guó)1:230000(~1/23萬(wàn))1:670000(~1/67萬(wàn))1:2770000(~1/277萬(wàn))日本（50混）1:51988(~1/5.2萬(wàn))1:348091(~1/35萬(wàn))1:2668696(~1/267萬(wàn))美國(guó)（24混）1:180000(~1/18萬(wàn))1:230000(~1/23萬(wàn))12:371
4、64054(~1/309萬(wàn))香港1:32786(~1/3.3萬(wàn))1:5456(~1/0.5萬(wàn))1:222(~1/0.02萬(wàn))核酸檢測(cè)在臨床診斷中的應(yīng)用定性診斷血液篩查病原體篩查診斷SNP和耐藥突變?cè)\斷基因型分型遺傳病診斷個(gè)體用藥診斷基因鑒定和配型……………定量檢測(cè)病情的評(píng)估和預(yù)后判斷抗病毒藥物療效的觀察新藥驗(yàn)證癌基因表達(dá)差異……………核酸是什么？核酸（NucleicAcid）是一種主要位于細(xì)胞核內(nèi)的生物大分子，其充當(dāng)著生物體遺傳信息的攜帶和傳遞。核酸廣泛存在于所有動(dòng)物、植物細(xì)胞、微生物內(nèi)。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)近2000種遺傳性疾病都和DNA結(jié)構(gòu)有關(guān)。腫瘤的發(fā)生、病毒的感染、射線對(duì)機(jī)體的
5、作用等都與核酸有關(guān)。核酸分類：DNA、RNA；DNA：dATP（A）、dTTP（T）、dCTP（C）、dGTP（G）；RNA：ATP、UTP、CTP、GTP；3’?5’磷酸鍵DNA結(jié)構(gòu)單鏈DNA形成雙鏈的原則—堿基互補(bǔ)配對(duì)：G-CT-A外部為磷酸和戊糖形成的骨架內(nèi)部為堿基互補(bǔ)形成的共價(jià)結(jié)合區(qū)域螺旋結(jié)構(gòu)核酸在體內(nèi)的復(fù)制DNA的熱變性DNA受熱，會(huì)解開雙鏈互補(bǔ)狀態(tài)，形成單鏈；降溫會(huì)恢復(fù)雙鏈狀態(tài)怎樣進(jìn)行核酸檢測(cè)？核酸檢測(cè)的一般流程核酸樣品的制備：從血液、體液、組織中提取或PCR擴(kuò)增樣品的檢測(cè)：核酸雜交、PCR、熒光定量PCR、PCR-ELISA等結(jié)果判讀：電泳、膜、熒光定量PCR
6、儀等核酸雜交核酸雜交是從核酸分子混合液中檢測(cè)特定大小的核酸分子的傳統(tǒng)方法。其原理是核酸變性和復(fù)性理論。即雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開，而在條件恢復(fù)后又可依堿基配對(duì)規(guī)律形成雙邊結(jié)構(gòu)。雜交通常在一支持膜上進(jìn)行，因此又稱為核酸印跡雜交。根據(jù)檢測(cè)樣品的不同又被分為DNA印跡交（Southernblothybridization）和RNA印跡雜交（Northernblothybridization）。核酸提取PCR擴(kuò)增探針點(diǎn)膜交聯(lián)雜交顯色結(jié)果判讀PCR聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction)，簡(jiǎn)稱PCR，是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA
7、片段?？煽醋魃矬w外的特殊DNA復(fù)制。DNA的復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，加入設(shè)計(jì)引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。PCR的產(chǎn)生實(shí)時(shí)熒光PCR在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)累積實(shí)現(xiàn)了實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，對(duì)起始模板進(jìn)行分析的方法,可以進(jìn)行定
