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1、第14卷第2期濰坊學(xué)院學(xué)報(bào)Vo1．14No．22014年4月JournalofWeifangUniversityApr．2014提取方法、試劑對(duì)不同高等植物葉片葉綠素提取效果的比較分析劉彩云'(1．山東省高校生物化學(xué)與分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東濰坊261061；2．濰坊學(xué)院，山東濰坊261061)摘要：分別采用浸泡法和研磨法，比較分析了7種混合試劑對(duì)煙草、油菜和毛白楊葉片葉綠素的提取效果。結(jié)果表明，7種提取試劑采用研磨法對(duì)三種供試植物葉片葉綠素的提取效果均優(yōu)于浸泡法，其中體積比為4．5：4．5：1的無水乙醇、丙酮和水的混合液研磨提取效果最好。關(guān)鍵
2、詞：高等植物；葉綠素提??；比較分析中圖分類號(hào)：Q94文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1671—4288(2014)O2—0074—03葉綠素是植物體重要的色素分子，也是植物葉色、生長(zhǎng)狀況的重要外在指標(biāo)。因此，在植物學(xué)、植物生理學(xué)等學(xué)科領(lǐng)域，葉綠素的提取及其定量分析是一個(gè)常用的實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)。目前對(duì)葉綠素的提取通常采用浸泡法和研磨法口]，提取試劑主要有乙醇、丙酮、石油醚、二甲基亞楓等有機(jī)溶劑或者其混合液，但具體試驗(yàn)研究中，各種提取試劑的配制比例、提取方法不盡相同¨3-7]，且未有文獻(xiàn)對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)地比較分析。介于此，本研究選用煙草、油菜和毛白楊新鮮葉片為供試植物材
3、料，比較分析了已有文獻(xiàn)報(bào)道的幾種葉綠素提取混合試劑對(duì)葉綠素的提取效果，以期為高等植物葉綠素的有效提取提供參考。1材料與方法1_1供試植物供試煙草、油菜葉片采自濰坊學(xué)院試驗(yàn)田，毛白楊葉片采自濰坊學(xué)院校園綠化植物。1．2提取試劑以目前已有文獻(xiàn)報(bào)道的7種有機(jī)溶劑混合液為提取試劑]，分別采用研磨和浸泡的方法對(duì)3種供試植物新鮮葉片組織中葉綠素含量進(jìn)行了提取和定量分析。這7種提取試劑分別是(1)809／6丙酮，(2)95乙醇，(3)95乙醇和8ooA的丙酮混合液(體積比為1：1)，(4)無水乙醇和丙酮混合液(體積比為1：1)，(5)95丙酮一乙醇(體積比為2
4、：1的丙酮、無水乙醇混合液用水稀釋至95)，(6)乙醇一丙酮混合液(無水乙醇、丙酮、水的體積比為4．5：4．5：1)，(7)石油醚和8O9／6的丙酮混合液(體積比為1：1)。1．3提取方法1．3．1浸泡法隨機(jī)取10個(gè)植株中部葉片各1片，去除葉脈，剪碎混勻后，稱取0．3g放入30ml三角瓶中，加入提取試劑10ml，使葉片完全浸入提取液中，封口膜封口置于30~C條件下暗培養(yǎng)24h。每種供試植物葉片分別設(shè)上述7種提取試劑處理，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。1．3．2研磨法隨機(jī)取1O個(gè)植株中部葉片各1片，去除葉脈，剪碎混勻后稱取0．3g，加入5mL提取試劑，冰浴研
5、磨，勻漿用濾紙過濾，并用研磨所用的試劑將濾紙上殘留勻漿沖洗干凈，最后定容至lOml。每種供試植物葉片分別設(shè)上述7種提取試劑處理，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。*收稿日期：2013—05—10基金項(xiàng)目：山東省高?？萍及l(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(J12LE54)作者簡(jiǎn)介：劉彩云(1975一)，女，甘肅寧縣人，濰坊學(xué)院生物與農(nóng)業(yè)工程學(xué)院講師，博士。研究方向：植物抗病育種及植物病生理研究。74—第2期劉彩云：提取方法、試劑對(duì)不同高等植物葉片葉綠素提取效果的比較分析1．4葉綠素含量的測(cè)定、計(jì)算分別以提取試劑為空白對(duì)照，采用723C型可見分光光度計(jì)測(cè)定各提取液在645、663處的吸
6、光度值，根據(jù)Arnon法公式計(jì)算各提取液中葉綠素含量。2結(jié)果與分析7種提取試劑分別采用浸泡法和研磨法對(duì)煙草、油菜和毛白楊葉片葉綠素的提取效果如圖1、圖2、圖3所示。由圖1、圖2、圖3可見，相同量的煙草、油菜和毛白楊葉片組織，7種提取試劑采用研磨法的提取效果均優(yōu)于浸泡法，但差別不明顯。采用體積比為4．5：4．5：1的無水乙醇、丙酮和水混合液研磨提取的葉綠素含量在三種供試植物材料中均最高，其次是體積比為2：1的丙酮一無水乙醇與水配制成的95％混合液。，25譽(yù)2015加105套0(1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)不同提取試劑圖1煙草葉片葉綠素的
7、提取效果25，、譽(yù)20衄11510瑪i}50(1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)不同提取試劑圖2油菜葉片葉綠素的提取效果30醬252015慨1O蠟-&-50(1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)不同提取試劑圖3毛白楊葉片葉綠素的提取效果3結(jié)論與討論葉綠素提取采用的浸泡法操作簡(jiǎn)單，但耗時(shí)較長(zhǎng)。研磨法操作費(fèi)力，但是省時(shí)，可以即研即測(cè)。本研究中，7種提取試劑對(duì)三種供試植物葉片采用研磨法的提取效果均優(yōu)于浸泡法，但二者差異不明顯。這表明，如果待提取植物材料量較少，可采用研磨方法。但由于葉綠素見光容易分解，加上研磨工作量較大，因一75—濰坊學(xué)院學(xué)報(bào)
8、2014年4月此，大批量樣品的提取不宜采用此方法。本研究選用煙草、油菜和毛白楊葉片作為供試植物材料，是因?yàn)闊煵莺陀筒巳~片質(zhì)地均較柔嫩，但
