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1、兩種葉綠素提取方法比較 摘要：以5種植物葉片為試驗(yàn)材料，采用分光光度法研究了4種提取溶劑及兩種提取方法對植物葉片葉綠素提取量的影響。結(jié)果表明，兩種提取方法中，丙酮與乙醇的混合溶劑提取整體上好于丙酮、乙醇單獨(dú)提取的效果；浸提法中，浸提時間為18h和24h效果較好，且浸提時間的增加降低了提取溶劑的影響。生產(chǎn)上采用混合溶劑提取時，浸提18h是較為理想的選擇。關(guān)鍵詞：葉綠素；提取方法；比較分析中圖分類號：Q244；TS202.3文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：0439-8114（2013）21-5303-02ComparativeAna
2、lysisofTwoExtractionMethodsofChlorophyllXUXin-juan，LIYong-chao，ZHANGShang-pan，SHENQi，ZHANGZhen-guo（HenanInstituteofScienceandTechnology，Xinxiang453003，Henan，China）Abstract：Withfiveplantleavesastheexperimentalmaterial，theeffectsoffourextractionsolventsandtwoextract
3、ionmethodsonchlorophyllcontentwerestudiedbyspectrophotometry.The4resultsshowedthattheextractionefficienciesofchlorophyllusingmixedsolventwerebetterthanusingacetoneorethanolalone.Theresultswerebetterwiththeextractiontime18hand24h，respectively，andtheeffectofextracti
4、onsolventwasreducedwithincreasingextractiontime.Inproduction，extractiontimeof18hisanidealchoicewithmixedsolventasextractionsolvent.Keywords：chlorophyll；extractionmethods；comparativeanalysis植物葉片葉綠素含量與光合作用關(guān)系密切，葉綠素含量的測定無論是在生理上還是在選育品種以及抗性研究等方面都很有必要性。分光光度法是測定葉綠素含量的經(jīng)典方法
5、，傳統(tǒng)的葉綠素提取方法為研磨法，即植物材料經(jīng)過研磨、過濾或離心、定容后再進(jìn)行比色測定4，整個過程繁瑣且誤差較大，操作中還易受光氧化的破壞，不適于對田間大量樣品的測定和大量葉綠素的提取，也不適合大批量樣本的應(yīng)急檢測。隨后提出的浸提法采用溶劑浸泡葉片的方法將葉綠素萃取出來，然后進(jìn)行比色測定。直接浸提植物葉樣并測定葉綠素提取量，免除了傳統(tǒng)提取中研磨、離心過濾等繁瑣手續(xù)，方法簡單易行、效率高，且減少了誤差來源，穩(wěn)定性好。王元軍[1]研究指出，研磨法提取黑豆芽菜葉綠素的效果好于浸提法，但很多植物上的應(yīng)用結(jié)果顯示浸提法比研磨法提取葉綠
6、素效率更高且穩(wěn)定性好[2-4]。但浸提法受多種提取試劑的影響，并且浸提時間的長短也影響最終的測定結(jié)果。因此，本研究以5種植物葉片為試驗(yàn)材料，采用4種不同的溶劑分別用研磨法和浸提法提取葉綠素，測定葉綠素提取量，研究浸提溶劑及浸提時間對葉綠素提取量的影響，并對浸提法和研磨法兩種提取葉綠素的方法進(jìn)行比較，以期為植物葉綠素的提取和測定提供參考依據(jù)。1材料與方法1.1材料供試材料為玉米、大豆、棉花、三葉草、爬山虎的葉片，均取自河南科技學(xué)院試驗(yàn)田。丙酮、95%乙醇及無水乙醇均為分析純試劑。1.2方法提取溶劑設(shè)80%丙酮、95%乙醇、混
7、合溶劑Ⅰ（V丙酮∶V無水乙醇=1∶1）、混合溶劑Ⅱ（V丙酮∶V無水乙醇=2∶1）。選擇正常生長的新鮮健全植物葉片，用紗布擦凈表明污物，避開主脈進(jìn)行取樣。剪碎后稱取約0.20g，一組用不同溶劑研磨并定容至25mL，過濾后分別測定提取液在663nm和645nm處的吸光度；另一組用不同溶劑直接浸提，浸提時間為6、12、18和24h，然后測定浸提液在663nm和6454nm處的吸光度。每次測定3次重復(fù)。采用Arnon公式計(jì)算葉綠素含量：葉綠素a含量（Chla，mg/g）=（12.7×A663nm-2.69×A645nm）×V/10
8、00×W葉綠素b含量（Chlb，mg/g）=（22.9×A645nm-4.68×A663nm）×V/1000×W葉綠素總含量（Chla+Chlb，mg/g）=（8.02×A663nm+20.21×A645nm）×V/1000×W式中，A663nm、A645nm分別為相應(yīng)波長下葉綠素提取液的吸光度，V為提
