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《檢測組胺方法的探討【文獻(xiàn)綜述】.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、畢業(yè)設(shè)計文獻(xiàn)綜述生物科學(xué)檢測組胺方法的探討［扌商要］一種物質(zhì)的測定，首先需要把該物質(zhì)從樣品屮分離出來，而樣品屮所含組分一般都較復(fù)雜，所以需要一種有效分離手段，將樣品各組分迅速分離。高效液相色譜作為一種高效分離手段，在纟R胺(histamine)的檢測屮運用較多。隨著飲食健康的深入人心，組胺作為食物是否含毒性的重要指標(biāo)，備國對進(jìn)出口水產(chǎn)品屮組胺含量的要求也越來越嚴(yán)格。木文主要論述了高效液相色譜法檢測出口水產(chǎn)品屮組胺含量。［關(guān)鍵詞］組胺高效液相色譜水產(chǎn)品組胺(hislamine)是存在于肥人細(xì)胞和嗜堿性粒
2、細(xì)胞顆粒屮的活性介質(zhì)，因過敏原刺激嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞脫顆粒而被釋放，可發(fā)揮促平滑肌收縮、血管擴(kuò)張、增強(qiáng)毛細(xì)血管通透性和黏膜腺體分泌等效應(yīng)，介導(dǎo)I型超敏反應(yīng)發(fā)生。高效液相色譜法是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上，引用了氣象色譜的理論，在技術(shù)上，流動相改為高壓輸送，色譜柱是一特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于經(jīng)典液相色譜；同時柱后還有高靈敏度的檢測器，可對流出物進(jìn)行連續(xù)檢測。與組胺產(chǎn)生有關(guān)的細(xì)菌普遍存在于鹽水環(huán)境中。它們一般存在于活的海魚的鯉和內(nèi)臟(腸)中而且不對魚產(chǎn)生危害。魚一旦死亡，魚類的防
3、御系統(tǒng)不能抑制細(xì)菌的生長，形成纟R胺的細(xì)菌開始生長，并且產(chǎn)生組胺。在一衛(wèi)生的條件下取出內(nèi)臟并去除魚鯉可以降低但不能消除形成纟R胺的細(xì)菌數(shù)量。然而，當(dāng)在不衛(wèi)生環(huán)境下操作，由于細(xì)菌擴(kuò)散到魚肉部分，這些步驟可能加速在魚的可食部分的組胺的產(chǎn)生過稈。1國內(nèi)外檢測組胺方法的探討：1.1熒光分析法熒光是物質(zhì)分了吸收光了能量被激發(fā)示，從激發(fā)態(tài)的最低振動能級返冋到基態(tài)時所發(fā)射出的光。在有機(jī)化合物屮，脂肪族化合物的分了結(jié)構(gòu)較簡單，能產(chǎn)生熒光的為數(shù)不多;芳香族及具有芳香結(jié)構(gòu)的化合物，因存在共轆體系而容易吸收光能，在紫外光照
4、射下很多能發(fā)射熒光。有時為了提高測定的靈敏度和選擇性，常使弱熒光性物質(zhì)與某些熒光試劑作用，以得到強(qiáng)熒光性產(chǎn)物。5?HT屬阿味胺類化合物，由蚓味和乙胺兩部分構(gòu)成，眄I味具有苯并毗咯的結(jié)構(gòu);HA在化學(xué)上屬咪卩坐類，為含兩個雜原了的五元雜環(huán)。5?HT和HA的分子結(jié)構(gòu)屮祁存在有多少不等的共轆體系，可以用熒光法測定HA［2］。七、八十年代熒光法以其特異、敏感、重復(fù)性好的優(yōu)點，曾得到廣泛應(yīng)用。但隨著色譜法的發(fā)展，已逐漸被取代，特別是對于一些含量其微的樣品，熒光法的靈敏度已達(dá)不到要求，因而熒光法檢測HA近年來并不多
5、見。1.2酶聯(lián)法Engvall和Perlmann(1971)首先丿M川建立這種方法，稱為酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme?linkedimmunosorbentassay,ELISA）。它是用酶一底物反應(yīng)來檢測抗原或抗體的方法。酶通常被偶聯(lián)到抗體上，關(guān)鍵是既要保留偶聯(lián)物的酶學(xué)活性，又要保留其免疫學(xué)作用。酶偶聯(lián)物的量由其合適的底物的顏色變化決定。所用的酶需有能產(chǎn)生易測定的有色或熒光產(chǎn)物的底物。隨著免疫和分了生物技術(shù)的發(fā)展，多克降抗組胺抗體以及抗血清索抗體的出現(xiàn)，商品化的ELISA測試盒也可用來檢測HA。在
6、原則上ELISA和放射免疫測定（RIA）很相似，ELISA相對而言有快速、價廉、檢測設(shè)備簡單的優(yōu)點。但對HA而言，采用ELISA進(jìn)行檢測，抗原抗體的特異性操作掌握起來有一定難度，而且難于精確定量，不適合含量較低的生物樣品的檢測。1.3氣象色譜法決定物質(zhì)能否使用氣相色譜進(jìn)行分離檢測的一個關(guān)鍵因素是該物質(zhì)的揮發(fā)性。HA帶有極性基團(tuán)（-0H）,組胺可以形成分子間的氫鍵，不易氣化，組胺的熔點83°C?84°C,沸點209oC-210oC（18mmHg）,若高溫氣化時很容易破壞。不過可通過衍生化反應(yīng)使其轉(zhuǎn)化為易
7、揮發(fā)性衍生物的方法，如硅烷化或氟化后揮發(fā)性增加，能降低氣化溫度進(jìn)行氣相色譜分離分析。可與電了捕獲檢測器（GC-ECD）或質(zhì)譜（GC?MS）聯(lián)用進(jìn)行檢測⑷。雖然此檢測方法能進(jìn)行準(zhǔn)確定量，但也存在一些缺點，首先是樣品前處理復(fù)雜，必須進(jìn)行衍生化反應(yīng)，使其揮發(fā)性增加，從而提高了實驗的難度;其次是儀器價格昂貴，實驗成木過高，在一定稈度上也限制了該方法的推廣應(yīng)用。1.4高效液相色譜法樣品通常用高氯酸來沉淀蛋A,通過勻漿、低溫高速離心后,上清液可直接進(jìn)樣。該方法局限性小,操作方便，檢測結(jié)果精確，故而高效液相色譜法成
8、為檢測水產(chǎn)品屮組胺含最的最常見方法2高效液相色譜特點高壓——壓力可達(dá)150?300kg/cm2o色譜柱每米降壓為75kg/cm2以上。高速——流速為0.1?10.0mL/min0高效——塔板數(shù)可達(dá)5000/米。在一根柱中同時分離成份可達(dá)100種。高靈敏度——紫外檢測器靈敏度可達(dá)O.Olngo同時消耗樣品少。3高效液相色譜法的優(yōu)點速度快——通常分析一個樣品在15-30min,有些樣品甚至在5min內(nèi)即可完成。分辨率高——可選擇固定相和流動相以達(dá)到最佳分離效
