熒光免疫層析技術(shù)原理進(jìn)展ppt課件.ppt

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1、熒光免疫層析技術(shù)的原理與進(jìn)展1熒光免疫層析技術(shù)的基本原理層析法(chromatography)的原理是利用混合物中各組分的物理性質(zhì)之差(如吸附力、分子形狀和大小、分子極性、分子親和力、分配系數(shù)等)而建立來的一種分離技術(shù)。層析系統(tǒng)是由固定相(stationaryphase)和流動(dòng)(MobilePhase)相組成。2固定相是固體物質(zhì)或固定于固體物質(zhì)上的成分。流動(dòng)相是可以流動(dòng)的物質(zhì)，如水或各種溶劑。層析過程：當(dāng)待分離混合物隨流動(dòng)相通過固定相時(shí)，由于混合物各組分的理化性質(zhì)的差異，與固定相相互作用弱的組分隨流動(dòng)相移動(dòng)時(shí)受到的阻滯作用小，向前移的速度快；與固定相相互作用

2、強(qiáng)的組分向前移動(dòng)的速度慢。從而實(shí)現(xiàn)混合物中各組分的分離。3免疫層析法免疫層析技術(shù)是建立在層析技術(shù)和抗原一抗體特異性免疫反應(yīng)基礎(chǔ)上的一項(xiàng)新興免疫檢測(cè)技術(shù)。4免疫層析技術(shù)以固定有檢測(cè)線和控制線的條狀纖維層析材料為固定相，測(cè)試液為流動(dòng)相，通過毛細(xì)作用使待測(cè)物在層析條上移動(dòng)。待測(cè)物在T線處發(fā)生特異性免疫反應(yīng)。游離物在C線處發(fā)生免疫反應(yīng)。待測(cè)物層析方向免疫反應(yīng)TC免疫層析技術(shù)基本原理示意圖5熒光（fluorescence）熒光物質(zhì)吸收激發(fā)光的能量后，電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，當(dāng)其回復(fù)至基態(tài)時(shí)，以發(fā)射光形式釋放出能量，稱為熒光。發(fā)射光譜和激發(fā)光譜發(fā)射光譜是指固定激發(fā)波長(zhǎng)，

3、在不同波長(zhǎng)下記錄的樣品發(fā)射熒光的強(qiáng)度。激發(fā)光譜是指固定檢測(cè)發(fā)射波長(zhǎng)，用不同波長(zhǎng)的激發(fā)光激發(fā)樣品記錄的相應(yīng)的熒光發(fā)射強(qiáng)度。6熒光效率定義:熒光物質(zhì)分子將光能轉(zhuǎn)變成熒光的百分率計(jì)算公式:熒光效率=熒光壽命定義:熒光物質(zhì)被激發(fā)后所產(chǎn)生的熒光衰減到一定程度時(shí)所用的時(shí)間。各種熒光物質(zhì)的熒光壽命不同。7熒光淬滅定義:熒光物質(zhì)在某些理化因素作用下，發(fā)射熒光減弱甚至消退稱為熒光淬滅。引起熒光淬滅的因素：有如紫外線照射、高溫、某些硝基化合物、重氮化合物等。8免疫層析技術(shù)以固定有檢測(cè)線和控制線的條狀纖維層析材料為固定相，測(cè)試液為流動(dòng)相，通過毛細(xì)作用使待測(cè)物在層析條上移動(dòng)。待測(cè)物

4、在T線處發(fā)生特異性免疫反應(yīng)。游離物在C線處發(fā)生免疫反應(yīng)。待測(cè)物層析方向免疫反應(yīng)TC免疫層析技術(shù)基本原理示意圖910競(jìng)爭(zhēng)法待測(cè)物中的某種抗原與T（檢測(cè)線）線處同種抗原競(jìng)爭(zhēng)性地與標(biāo)記抗體相結(jié)合的過程。11競(jìng)爭(zhēng)法含抗原AY1:A的單抗與標(biāo)記物的偶聯(lián)體Y2：抗原AY3:羊抗鼠二抗結(jié)合墊免疫層析法檢測(cè)的實(shí)物圖12夾心法待測(cè)物中某種抗體（抗原）與T線處抗原A（抗原A）以及熒光標(biāo)記的抗原（抗體）特異性相結(jié)合的過程，在T線處形成抗體A+抗原+抗體B形式的夾心結(jié)構(gòu)。結(jié)合墊免疫層析法檢測(cè)的實(shí)物圖13雙抗體夾心法(k)Ab1-Ag-Ab2(k)Ab1(k)Ab1-AgAb2Ab3

5、-(k)Ab1TC陽性結(jié)果T,C均有顏色待測(cè)液含抗原Ag待測(cè)液，不含抗原Ag(k)Ab1(k)Ab1(k)Ab1Ab2TCAb3-(k)Ab1陰性結(jié)果T無顏色，C有顏色雙抗體加心法檢測(cè)原理圖K代表某一標(biāo)記物結(jié)合墊免疫層析法檢測(cè)的實(shí)物圖14雙抗原夾心法雙抗原夾心反應(yīng)模式陽性檢測(cè)（左）與陰性檢測(cè)（右）15利用熒光免疫層析試紙條可以實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)物的定性或者定量檢測(cè).1617金顆粒之間存在的靜電斥力使其在水中保持相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)，形成穩(wěn)定的水溶性膠體，即稱為膠體金膠體金18膠體金既有明亮的色彩，又有高電子密度，可以吸附生物大分子，且不影響生物分子的活性，故可作為生物分子

6、的標(biāo)志物，用于免疫反應(yīng)中抗原或抗體的標(biāo)記定位，定性甚至定量研究。層析試紙標(biāo)記用金顆粒的直徑大多在20～40nm，呈深紅色。19膠體金標(biāo)記蛋白質(zhì)的過程是蛋白被動(dòng)吸附到金顆粒表面的過程。由于蛋白分子牢固地結(jié)合在金顆粒表面，形成一個(gè)蛋白層，阻止了膠體金顆粒的相互接觸，而使膠體金處于穩(wěn)定狀態(tài)。20膠體金作為標(biāo)志物有以下優(yōu)勢(shì):①幾乎可標(biāo)記所有的蛋白分子，過程簡(jiǎn)單，效率高，用量少，便宜，基本不改變被標(biāo)記蛋白的活性。且穩(wěn)定，無毒，使用方便，保質(zhì)期長(zhǎng)。②不同直徑的納米金可以用于多重標(biāo)記。③結(jié)果判斷只需普通光學(xué)儀器或直接肉眼觀察。21膠體金作為標(biāo)記物的應(yīng)用22試孕紙2324應(yīng)

7、用（定量）08天津大學(xué)精密儀器與光電子工程學(xué)院與天津市進(jìn)出口檢驗(yàn)檢疫局合作開發(fā)研發(fā)一種便攜式儀器。競(jìng)爭(zhēng)法原理用于農(nóng)藥殘留定量檢測(cè)252鑭系元素鑭系元素又稱為稀土金屬元素，指元素周期表中原子序數(shù)57～71的所有元素。26兩種不同鑭系元素離子(分別作為光吸收子和發(fā)射子)摻雜入亞微米尺寸的陶瓷顆粒(作為主基質(zhì))中，會(huì)構(gòu)成一類能上轉(zhuǎn)發(fā)光產(chǎn)生熒光的特殊材料。——UCP(up-convertingphosphor，UCP)顆粒。27UCP顆粒主要含有如下三種成分:主基質(zhì)：氧硫化物（Y2O2S,GdO2S）、氟化物(YF3,GdF3）、硅酸鹽(YSi2O5,YSi3O7）

8、...吸收子Yb3+Er3+Sm3+發(fā)射子Er3+H