氯化鈣對小麥在鹽脅迫培養(yǎng)下的緩解作用.doc

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1、植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技能測試（設(shè)計性實(shí)驗(yàn)）姓名：學(xué)號：班級：2010級農(nóng)資班實(shí)驗(yàn)時間：2012.662012氯化鈣對小麥在鹽脅迫培養(yǎng)下的緩解作用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、研究鹽分脅迫對小麥生理發(fā)育的影響。2、外源鈣鹽對脅迫條件下小麥種子的緩解作用及其機(jī)理。3、熟悉在未經(jīng)分離的葉綠體色素溶液中測定葉綠素a、b和類胡蘿卜素的方法及計算二、實(shí)驗(yàn)原理：1、鹽脅迫條件下，小麥的生理發(fā)育收至懷同程度的抑制，應(yīng)用夕卜源物質(zhì)來減輕鹽害。本實(shí)驗(yàn)選用外源氯化鈣來進(jìn)行緩解，通過測量無脅迫、緩解前和緩解后小麥葉中的葉綠素含量進(jìn)行比較。當(dāng)植物受到逆境脅迫時，能通過提高細(xì)胞質(zhì)的游離鈣離子的濃度，并通過Ca2+與

2、鈣調(diào)素結(jié)合啟動一系列生理生化過程，在作物對逆境脅迫的感受、傳遞、響應(yīng)和適應(yīng)過程中發(fā)揮重要作用。2、在663nm、645nm、470nm(分別是葉綠素a、葉綠素b、類胡蘿卜素在紅光區(qū)的吸收峰)的光吸收，然后根據(jù)Lambert.Beer定律，計算出提取液中葉綠素a、葉綠素b、和類胡蘿卜素的濃度。Ca=12.21A663-2.81A645(1)Cl^20.13A645-5.03A663(2)CT=Ca+Ou8.05A663+20?29A645(3)Cx.c=(1000D4703?27Ca-104Cb)/229(4)Ca—白(mg/L)Cb—(mg/L)的總(m^L)Cx.c-

3、^iW*卜^^(mg/L)82.04和9.27—啪錄素a和葉綠素b在663nm下的比吸收系數(shù)16.75和45.60—Hi綠素a和葉綠素b在645nm下的比吸收系數(shù)三、實(shí)驗(yàn)材料與用具：1、材料：無脅迫、緩解前和緩解后的小麥葉片，2、試劑：10%的氯化鈉溶液，10%氯化鈣溶液，分光光度計，離心機(jī)，試管若干，濾紙若干，培養(yǎng)皿，80%丙酮或96%乙醇；石英砂，CaCO33、儀器：%1.實(shí)驗(yàn)步驟:1、挑選大小一致、飽滿的小麥籽粒，置于鋪有一層紗布的培養(yǎng)皿內(nèi)并加入蒸懈水進(jìn)行培養(yǎng)，一個實(shí)驗(yàn)組和一個對照組。2、等小麥長出葉子且葉子長度大約為2—3cm時，在一、二號培養(yǎng)皿中加入10%的氯

4、化鈉溶液，在三號培養(yǎng)皿中加入蒸f留水，繼續(xù)培養(yǎng)三天，并觀察小麥的生長發(fā)育狀況。3、三天后，在一號培養(yǎng)皿中加入10%氯化鈣，二、三號培養(yǎng)皿中加入蒸懾水，繼續(xù)培養(yǎng)三天并觀察小麥的生長發(fā)育狀況。4、提取葉綠索在一、二、三號培養(yǎng)皿中選取有代表性的小麥葉片，各稱取0.2g剪碎后置于研體屮，加入5兇80%丙酮，少許CaCO3和石英砂。充分研磨(組織變白)，再加10ml80%W酮，靜止3?5分鐘，沖洗研休后轉(zhuǎn)至離心管，定容至15ml,3000轉(zhuǎn)、15分鐘，取上清液用80%丙酮定容至25mlo5、測定OD值:取上清液1ml,加80%丙酮4ml,以80%丙酮作空白對照，用分光光度計分別測

5、定葉綠素提取液在645nm>663nm>470nm下的吸光度。6、計算：把測岀的吸光值帶入(1)(2"3)(4)式計算葉綠素a、b、a+b和類胡蘿卜素的濃度。根據(jù)下式求出植物組織中葉綠索的含量：葉綠素的含雖(mg/g)=cXvXn/mC—葉綠素的濃度(mg/L)；v—提取液體積(ml)；n一稀釋倍數(shù)；m—樣品鮮重(g)五、實(shí)驗(yàn)思考題：1、鹽脅迫下鈣離子對小麥生長發(fā)育有何影響？2、鹽處理対小麥生長發(fā)育的影響有哪些？