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《人β—防御素—2在涎腺腫瘤及涎腺炎癥中的表達(dá)及其意義.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、人B—防御素一2在涎腺腫瘤及涎腺炎癥中的表達(dá)及苴音義［摘耍］目的研究涎腺良性腫瘤組織、惡性腫瘤組織和涎腺炎癥中人B-防御素-2(HBD-2)mRNA和蛋白的表達(dá)特征。方法對不同涎腺組織,采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(Real-TimePCR)和免疫組化檢測HBD-2的表達(dá)，并分析HBD-2mRNA和蛋白在涎腺良性腫瘤組織、惡性腫瘤組織、炎癥組織和正常涎腺組織屮的表達(dá)差異。結(jié)果與涎腺正常組織比較，良性腫瘤組HBD-2mRNA表達(dá)量為其6.468倍，顯著高于涎腺正常組織組(P〈0?05)；惡性腫瘤組為其0.3
2、34倍，顯著低于涎腺正常組織組(P〈0.05)；涎腺炎癥組為其10.563倍，顯著高于涎腺正常組織組(P<0.05)oHBD-2不僅在這些組織的細(xì)胞質(zhì)中有表達(dá)，而且在惡性組織中的細(xì)胞核也有表達(dá)。結(jié)論HBD-2在涎腺良性腫瘤組織及涎腺炎癥組織屮高表達(dá)，在涎腺惡性腫瘤組織中低表達(dá)，其蛋白發(fā)生核轉(zhuǎn)移。［關(guān)鍵詞］人0-防御索-2；涎腺腫瘤；涎腺炎癥［中圖分類號(hào)］Q786［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A［doi］10.7518/hxkq.2013.05.017在我國涎腺腫瘤占人頭頸部腫瘤的2%?3%［1］,發(fā)病率比較高，常發(fā)生在主要的腺體中。B-
3、防御素屬于抗菌肽(antimicrobialpeptides,AMPs),在天然免疫過程中表現(xiàn)多種作用，屬于固有免疫系統(tǒng)，對于抗原呈遞的樹突細(xì)胞具有誘導(dǎo)刺激作用［2］。最近人B-防御素-2(humanbeta-defensin-2,IIBD-2）被認(rèn)為是位于染色體8p23上的備用腫瘤抑制基HBD-2基因在一系列細(xì)胞中的超表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡蛋白-3調(diào)控細(xì)胞凋亡或者是細(xì)胞的完全死亡通過特殊的細(xì)胞表血受體來調(diào)節(jié)［3］。HBD-2首先在牛皮癬患者的皮膚中被發(fā)現(xiàn)，還表達(dá)于包皮、肺、氣管、口腔黏膜等組織［4］,HBD-2通過上皮表面分
4、泌的一種小的可溶縮氨酸發(fā)揮抗菌作用。IIBD-2能被細(xì)菌、細(xì)菌毒性產(chǎn)物以及諸如白細(xì)胞介素（interleukin,IL）IB、ILT6、IL-8或者腫瘤壞死因子-a（tumornecrosisfactor-ci,TNF-a）等細(xì)胞因子誘導(dǎo)，此外合成的HBD-2能抑制膀胱癌細(xì)胞系TSU-Prl的增殖，可導(dǎo)致腎癌細(xì)胞的凋亡［5］o在90%的腎癌細(xì)胞和82%的惡性前列腺癌中都發(fā)現(xiàn)有IIBD-2的減少，而在良性的上皮瘤中有持續(xù)的高表達(dá)［6］。本實(shí)驗(yàn)旨在研究HBD-2niRNA和蛋白在涎腺良性腫瘤組織、惡性腫瘤組織、炎癥組織和正常
5、涎腺組織屮的表達(dá)情況，及其在這些中的表達(dá)位置。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料Trizol（Gibco公司，美國），PrimeScriptRTMasterMix>PremixTaqVersion2.0>實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（real-timepolymerasechainreaction,Real-TimePCR）SYBRPremixExTaq（Takara公司，日本）,免疫組織化學(xué)試劑盒（Invitrogeng公司，美國），SP免疫組化試劑盒（北京中杉生物技術(shù)有限公司）。實(shí)驗(yàn)引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。HBD-2
6、的上游引物：5'-CATGAGGGTCT-TGTATCTCCTCT-3',下游引物：5，-CCTCCTCAT-GGCTTTTTGCAGC-3'。3-actin的上游引物：5'-AA-ACTGGAACGGTGAAGGTG-3',下游引物：5'-AG-TGGGGTGGCTTTTAGGAT-3'。1.2方法1.2.1標(biāo)本采集選取2008-2010年在北京大學(xué)深圳醫(yī)院經(jīng)手術(shù)和病理證實(shí)的涎腺良性腫瘤標(biāo)本32例，其中男19例，女13例，平均年齡45.7歲。正常涎腺標(biāo)本23例，其屮男13例，女10例，平均年齡43.5歲。惡性腫瘤標(biāo)木1
7、0例，其中男6例，女4例，平均年齡57.6歲。炎癥標(biāo)本16例，其中男10例，女6例，平均年齡52.9歲。所選標(biāo)本一份保存于液氮中，用于提取RNA；—份以4%多聚甲醛固定，4°C存放，用于免疫組化檢測。以上標(biāo)本的獲得均取得患者知情同意。1.2.2HBD-2在涎腺良性腫瘤組織、惡性腫瘤組織、炎癥組織和正常涎腺組織中的表達(dá)用Trizol法從各個(gè)標(biāo)木中提取niRNA,按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明，將mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA；將cDNA用于PremixTaqVer-sion2.0試劑做PCR分析表達(dá)情況。并將cDNA用于Real-Time
8、PCR,定量檢測HBD-2mRNA表達(dá)，具體的步驟參照試劑盒說明。Real-TimePCR條件：95°C5min；94°C30s,62°C30s,72°C30s,40個(gè)循壞；72°C5mine對HBD-2以及內(nèi)參照P-actin分別進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增，PCR定量計(jì)算mRNA,待測樣品中的表達(dá)量用2-ACt表示
