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《洗衣粉抗(抑)菌效果鑒定.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、2.1.8.6洗衣粉抗（抑）菌效果鑒定方法82丄&6.1原理木方法通過模擬洗衣機(jī)的洗衣過程，檢測(cè)抗（抑）菌洗衣粉（劑）的抗菌作用。2.1.8.62試驗(yàn)器材（I）試驗(yàn)菌株大腸桿菌ATCC11229,金黃色匍萄球菌ATCC653&⑵培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂（瓊脂含量為1.5%）營養(yǎng)瓊脂A：在營養(yǎng)瓊脂屮另加入1.5%的瓊脂。TSA營養(yǎng)肉湯。（3）牛血清白蛋白（過濾除菌）⑷烷基酚聚氧乙烯瞇（Tergitol）⑸碳酸鈉⑹柿淮硬水（7）非離了浸濕劑：見測(cè)試O制備部分⑻沖洗溶液（9）屮和劑（經(jīng)屮和劑鑒定試驗(yàn)合格）（10）吐溫80（過濾除菌）（II）去離了水或蒸鎘水
2、滅菌（12）不銹鋼轉(zhuǎn)軸（由一條肓徑0.16cm不銹鋼絲制成，如圖2?2）俯視圖側(cè)面圖圖2?2纏繞測(cè)試布條的不銹鋼轉(zhuǎn)軸（13）有金屬螺蓋的玻璃罐（容積為470ml,可高壓滅菌，并可放入轉(zhuǎn)軸的廣口罐）,將罐口覆蓋牛皮紙,加蓋，于12FC滅菌25min備用。（14）轉(zhuǎn)動(dòng)速度為45t/min-60i/min的滾動(dòng)搖床（15）可調(diào)恒溫水浴箱（16）吸管（1ml,5ml,和10ml）（1刀培養(yǎng)皿（18）鋪有濾紙的玻璃培養(yǎng)皿。（29）菌種保存管（20）細(xì)菌培養(yǎng)箱（21）渦流振蕩器（22）細(xì)菌比濁儀（23）棉布（32支紗心n><32支紗/cm平織棉布）（2
3、4）別針、鍛了、無菌手套、3mm7mm玻璃珠、秒表、載體布片25cm><3.75cm，見測(cè)試棉布準(zhǔn)備。21.8.63實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備⑴測(cè)試傅何飾恪%1^離了浸潤劑的制備:取5g烷基酚聚氧乙烯陋，5g碳酸餉加入到1L去離了水中。%1洗滌液的制備：1龜非離了浸潤劑，1.5g碳酸鈉，加入到3L去離了水屮。將大約300g測(cè)試棉布加入3L洗滌溶液。加熱煮沸l(wèi)h。取出棉布在煮沸的去離了水屮清洗5mino然后放入涼去離了水屮5min0以去除殘留的浸潤劑。然后將棉布晾干。⑵測(cè)試棉布和轉(zhuǎn)動(dòng)支架的準(zhǔn)備：取處理過的棉布剪成5cm寬，重量為15g±lg的布條將其一端插入固
4、定在測(cè)試轉(zhuǎn)動(dòng)支架的水平方向的外邊然后在3條水平支架間以足夠的張力纏繞12個(gè)整圈，將布條的另一端用不銹鋼別針固定在前一圈布條上。最后以121°C壓力蒸汽滅菌15min,備用。⑶細(xì)菌懸液的制備：取0.5ml營養(yǎng)肉湯凍干的菌種溶解接種于含10ml的營養(yǎng)肉湯的試管，于35°C±2°C培養(yǎng)24h。然后，振蕩混合均勻。用1甲接種環(huán)在營養(yǎng)瓊脂平板上劃線，置于35°C±2°C培養(yǎng)24h。然后，從平板上挑取單個(gè)菌落種入菌種保藏管屮，上下?lián)u動(dòng)10次，吸棄多余液體，K-80°C冰箱保存。試驗(yàn)前，從菌種保藏管屮取出1粒帶菌小顆粒放入營養(yǎng)瓊脂斜面，晃動(dòng)斜面。將斜面至
5、35°C培養(yǎng)24h。每天轉(zhuǎn)種1次，連續(xù)傳3代。第四天,用5m1PBS洗脫斜面上的菌苔,取0.5ml加入到含9.5mlPBS的試管中,混勻，取1ml?2ml加入含有20ml營養(yǎng)瓊脂B的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使菌液覆蓋整個(gè)瓊脂表面。吸棄多余菌液，然示將培養(yǎng)瓶倒置平放在35°C培養(yǎng)箱屮，培養(yǎng)24h。用5m1PBS和3g滅菌玻璃珠洗脫細(xì)胞瓶屮的菌體，用PBS調(diào)整濃度至lxlOKcfu/ml?5xl08cfu/ml,然后加入3%的牛血清白蛋白。（4）染菌載體的制備：每片載體接種20山菌懸液，放
6、叫培養(yǎng)川1?屮，加蓋，于35°C±2°C在培養(yǎng)箱屮干燥
7、20mino（5）測(cè)試樣品的制備：至少在實(shí)驗(yàn)開始前20min,將盛有265ml硬水的玻璃罐在水浴箱屮恒溫至測(cè)試溫度（25°C±1°C）O加入被測(cè)試樣品混合溶解。2.1.&6.4試驗(yàn)步驟（1）將兩片染菌載體放入轉(zhuǎn)動(dòng)支架的第6和7層布條Z間，將第3片放入第7和8層布條之間。⑵以無菌操作方式將轉(zhuǎn)動(dòng)單元（支架、布條和染均載體）放入含有測(cè)試產(chǎn)品的玻璃罐屮，加蓋。（3）玻璃罐固定在搖床上，滾動(dòng)旋轉(zhuǎn)洗滌20min,取下玻璃罐。（4）以無菌操作方式，取出轉(zhuǎn)動(dòng)單元，取出3片染菌載體，放入到含有30ml中和劑（在測(cè)試抗菌產(chǎn)品的抗菌作用時(shí)，不加屮和劑，只加入含0
8、.5%吐溫80的PBS）的試管屮，在振蕩器屮混合10so然后振打200次,用PBS做10倍系列稀釋,并選擇適宜稀釋度樣液接種TSA平板。每個(gè)稀禪度接種兩個(gè)平板。⑸對(duì)照組除用05%（V/V）的吐溫80替代測(cè)試產(chǎn)品外，其它實(shí)驗(yàn)條件和步驟均與試驗(yàn)組相同。（6）菌數(shù)對(duì)照將3片染菌載體加入含有30ml05%吐溫80的PBS試管屮，在振蕩器振蕩10s,然麻振打200次，用PBS做10倍系列稀釋，并取適宜稀釋度樣液1.0ml,以傾注法接種TSA平板，每個(gè)稀釋度接種兩個(gè)平樁（7）將試驗(yàn)組、對(duì)照組和菌數(shù)對(duì)照組平板倒置于35°C±2°C培養(yǎng)箱屮，培養(yǎng)48h±4
9、h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)。⑻結(jié)果計(jì)算試驗(yàn)重復(fù)3次。記錄并計(jì)算測(cè)試樣品的細(xì)菌總數(shù)的對(duì)數(shù)值，求其平均值。21.8.65評(píng)價(jià)規(guī)定按2.1.743（7）的方法計(jì)算抑菌率,抑菌率達(dá)到50%可判為該抗
