工程菌的培養(yǎng).doc

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1、一、工程菌的培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)冃的學(xué)習(xí)工程菌的培養(yǎng)技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理工程菌的保藏一般采用甘油法,它是工程菌常用的方法之一。工程菌在低溫條件下保藏一段時(shí)間后,其活性會(huì)降低。因此,工程菌在使用吋需要重新活化培養(yǎng),一般是取少量的日油菌活化后劃線培養(yǎng),待平板丄長出單菌落,挑取單菌落接種至液體培養(yǎng)基上,即得到可使用的工程菌。三、實(shí)驗(yàn)儀器及菌種1、三角瓶、無菌超凈工作臺(tái)、培養(yǎng)箱、酒精燈、槍頭等2、含有H的基因質(zhì)粒的大腸桿菌甘油菌(含質(zhì)粒PUCI8)四、實(shí)驗(yàn)步驟1、培養(yǎng)基的配制LB液體培養(yǎng)基:蛋白月東10g/L,酵母提取物5g/L,NaCL5g/L,PH=7.0LB固體培養(yǎng)基:蛋白月東10g/L,

2、酵母提取物5g/L,NaCL5g/L,瓊脂16g/L,PH=7.02、培養(yǎng)基及器材的滅菌將培養(yǎng)基、槍頭、三角瓶、培養(yǎng)皿等放入高壓滅菌鍋屮I2I°C,滅菌20mino3、無菌超凈工作臺(tái)的滅菌打開無菌超凈工作臺(tái),紫外燈滅菌30mino4、甘油菌的活化將I「油菌接入附加有抗生素(Kan50mg/L)的液體培養(yǎng)基屮,在恒溫培養(yǎng)箱屮振蕩中37°C培養(yǎng)12-16ho5、菌種的劃線培養(yǎng)將培養(yǎng)過夜的菌液,用接種環(huán)接種至固體培養(yǎng)基,37°C培養(yǎng)12-16ho6、菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)用牙簽或者槍頭挑取-單菌落接入液體培養(yǎng)基耳?,在恒溫培養(yǎng)箱屮振蕩11137°C培養(yǎng)12-16ho五、思考題1、在培養(yǎng)基屮

3、加入抗生素的作用是什么?2、本實(shí)驗(yàn)屮操作應(yīng)注意的事項(xiàng)是什么?

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