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1、獺兔毛色相關(guān)基因的篩選及Crebl基因的克隆和多態(tài)性分析研究生：秦立志導(dǎo)師：吳信生教授專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖(揚州大學(xué)動物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚州225009)中文摘要家兔的毛皮尤以獺兔皮柔軟、美觀、輕便、保暖性好，倍受眾多消費者的青睞，是一種非常重要的經(jīng)濟(jì)性狀。哺乳動物毛色形成主要受多種多樣的相關(guān)基因調(diào)控。本試驗通過基因芯片技術(shù)比較青紫藍(lán)色獺兔和白色獺兔背部皮膚組織樣基因的表達(dá)差異，利用實時熒光定量PCR技術(shù)驗證芯片結(jié)果，結(jié)合生物信息學(xué)分析和國內(nèi)外學(xué)者的研究報道，進(jìn)一步篩選與毛色形成相關(guān)差異候選基因進(jìn)行后續(xù)研究，以期為獺兔毛色遺傳機(jī)
2、制提供一定的基礎(chǔ)。本試驗的主要結(jié)果如下：1．利用表達(dá)譜芯片技術(shù)篩選3組全同胞青紫藍(lán)色獺兔和白色獺兔背部皮膚組織中的差異表達(dá)基因，發(fā)現(xiàn)有89個共有的差異基因在三組中表達(dá)趨勢一致。通過實時熒光定量PCR技術(shù)對Crebl、Wnt2、Gnaq和Gnal4這4個基因在組織樣中的表達(dá)量進(jìn)行檢測，驗證基因芯片結(jié)果。結(jié)果表明芯片的結(jié)果相對可靠。結(jié)合生物信息學(xué)分析和文獻(xiàn)報道，找到了Crebl、TH、Wnt2、Gnaq、Dvll、Mapkl2等可能與毛色形成相關(guān)的基因。Creb磷酸化可以活化下游M1TF基因的表達(dá)，進(jìn)而激活TYR基因轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)黑色素生成
3、。因此，我們選擇Crebl基因作進(jìn)一步研究。2．克隆了獺兔Crebl基因編碼序列，并將其與人、牛等10個物種編碼的氨基酸序列進(jìn)行了同源性比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)該基因編碼的氨基酸序列在不同的哺乳動物中都具有非常高的同源性，均在92％以上，與禽類、兩棲類的同源性也較高，均在80％以上，說明該基因在物種進(jìn)化過程中相對比較保守。通過對Crebl基因編碼蛋白的生物信息學(xué)分析預(yù)測發(fā)現(xiàn)，該蛋白是細(xì)胞核內(nèi)親水蛋白質(zhì)。利用Hopfield神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)在線分析發(fā)現(xiàn)，Crebl蛋白含有327個氨基酸，其二級結(jié)構(gòu)包含a螺旋(h)33．33％，無規(guī)卷曲(c)44．95％
4、，延伸鏈(e)21．71％。三級結(jié)構(gòu)預(yù)測發(fā)現(xiàn)，Crebl蛋白含有一條螺旋鏈，沒有復(fù)雜交織，II結(jié)構(gòu)較為簡單。本試驗為了更深入了解獺兔Crebl基因在色素細(xì)胞增殖過程中的作用，利用載體構(gòu)建等技術(shù)，成功構(gòu)建獺兔Crebl基因的真核表達(dá)載體。3．本試驗采用PCR．SSCP技術(shù)，以白色獺兔、青紫藍(lán)色獺兔共228只個體為試驗對象，針對Crebl基因的六個外顯子設(shè)計特異性引物，檢測獺兔該基因編碼序列的多態(tài)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，六對引物對應(yīng)的擴(kuò)增片段均未出現(xiàn)多態(tài)。關(guān)鍵詞：獺兔；毛色；候選基因：基因芯片：Crebl基因：克??；基因多態(tài)性IIIIdentif
5、icationofgenesrelatedtofurcolorandcloninganddiversityanalysisofCreblgeneinRexrabbitM．S．Candidate：QhaLizhiSupervisorProf．"WuXinsheng(CollegeofAnimalScienceandTechnology,YangzhouUniversity,225009)AbstractRabbitfurs，especiallyRexrabbitfurs，arefavoredbycA)nsumol'Sfortheiri
6、nherentbeauty,lightness，softness，andgoodwarmthretentionproperties．Theyaleofgreateconomicvalue．Thecolorformationprocessinmammalsismainlyregulatedandcontrolledbydiverserelativedgenes．Ourstudyachieveddifferentiallyexpressedgenes(DEGs)betweendarkchinchillaRexrabbitsandwhit
7、eRexrabbitsviagenechiptechnology．SomegeneswereseleetedfromtheDEGsforvalidationbyquantitativereal-timePCRanalysis．Andthen，Candidategeneswerefoundthatwererelatedtofurcolorformationbybothnationalandforeignscholars’researchreportsandbioinformaticsanalysis．Keygenesachieveda
8、ndprovidetheoreticalbasisforthemolccdargeneticsassodatedwithfurcolordeterminationinRexrabbits．Themainresultsareasfoll
