南方紅豆杉聚戊烯醇的分離純化與抗肝纖維化作用研究.pdf

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1、ADissertationSubmittedtoZhejiangUniversityinPartialFulf'lllmentoftheRequirementsforPh．D．DegreeSTUDIFcSONTHEISOLATIONANDPURIFICATIONOFPOLYPRENOLSFROMTAXUSCHINENSISVAR．MA／RE／Candidate：JinhuiYuSupervisor：￡絲f．ChengxinFu。。。。I●_______●_一————————______-____一￡￡Q￡旦墜壘Q

2、i璺墜April，2012Hangzhou，China獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得逝姿盤堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：寺貔簽字日期：知f≯年∥月叫日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解逝’江盤堂有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)

3、家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)逝姿態(tài)鱟可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：0倉(cāng)．霓L導(dǎo)師簽名：簽字日期：加I2，年Z月糾日氣張嗲簽字日期：∞I乒年6月刁日浙江大學(xué)博士學(xué)位論文摘要摘要中藥材資源的綜合利用對(duì)中藥行業(yè)的可持續(xù)發(fā)展起著舉足輕重的作用。以有限的資源創(chuàng)造最大的價(jià)值，是保護(hù)中藥材資源的重要內(nèi)容。南方紅豆杉(TaxusChinensisvar．m

4、airei)是提取紫杉醇及其前體物質(zhì)的重要原料，由于針葉內(nèi)此類物質(zhì)含量低導(dǎo)致在生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生大量的廢棄物。而南方紅豆杉針葉中及生產(chǎn)紫衫醇類化合物產(chǎn)生的廢棄物中富含聚戊烯醇類化合物，這為紅豆杉針葉資源的綜合利用開辟了新的途徑。本文對(duì)南方紅豆杉針葉中的聚戊烯醇化合物進(jìn)行了提取分離、檢測(cè)、組分分析、含量變化、純化制備、結(jié)構(gòu)鑒定、以及抗肝纖維化活性等一系列研究，旨在為南方紅豆杉針葉資源的綜合利用和可持續(xù)發(fā)展提供理論依據(jù)，同時(shí)為其他中藥材資源的合理利用提供借鑒。主要研究結(jié)果如下：(1)采用索氏提取方法提取南方紅豆杉針葉中的

5、聚戊烯醇類化合物，建立了聚戊烯醇的高效液相色譜和液質(zhì)聯(lián)用等分析方法。HPLC具體分析參數(shù)為：XBridgeRPC18(5lain，4．6llllll×250刪岫；柱溫40℃：流速：1．5mL／mim進(jìn)樣量：10此：紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：210nnl。流動(dòng)相：甲醇(A)和異丙醇(B)，梯度洗脫：0-5min，40％B；5—35min，40％_75％B：36min，40％B：50min，40％B。結(jié)果表明，南方紅豆杉聚戊烯醇(Taxuspolyprenols，TPs)共有l(wèi)1個(gè)同系物，并呈雙家族分布特征。(2)利用上述方法分

6、析了不同月份南方紅豆杉當(dāng)年生針葉中TPs的含量結(jié)果表明，不同年齡植株針葉中TPs的含量變化趨勢(shì)基本一致，即自生長(zhǎng)初期開始積累至10-11月份達(dá)到最高(42．43rag／g)，當(dāng)氣溫降低含量下降，待次年4月份又有回升趨勢(shì)，說(shuō)明植株內(nèi)TPs可能與溫度存在～定的相關(guān)關(guān)系。不同年齡植株同一時(shí)間的TPs含量也有所差異，這可能是微環(huán)境不同所致。此外，初步研究表明光照強(qiáng)度對(duì)葉片內(nèi)TPs含量有一定影響，高光強(qiáng)有利于聚戊烯醇類物質(zhì)的積累。(3)對(duì)南方紅豆杉聚戊烯醇的規(guī)?；蛛x純化制備工藝進(jìn)行了系列研究，以期為南方紅豆杉聚戊烯醇的廣

7、泛應(yīng)用提供技術(shù)基礎(chǔ)。以索氏提取法制備TPs粗提物浸膏，通過(guò)丙酮冷析、水解、硅膠柱色譜等除雜方法對(duì)TPs的純化工藝進(jìn)行了探索，工藝如下：粗提物制備參數(shù)：800g南方紅豆杉針葉原料，80。C索氏提取12h。水解參數(shù)：樣品，石油醚提取物100g：轉(zhuǎn)速，240rpm／min；水解液，浙江大學(xué)博士學(xué)位論文摘要5％NaOH甲醇溶液(含0．05％焦沒食子酸)；水解溫度60"C；水解時(shí)間：8h。丙酮冷析參數(shù)：4-5℃，4h或室溫下24h。硅膠柱層析參數(shù)：上樣量1：30，洗脫液石油醚和乙酸乙酯(19：1，v／v)，洗脫流速30mL

8、／min。根據(jù)以上參數(shù)制備聚戊烯醇得率約為0．6％。按照以上流程及工藝參數(shù)制備TPs(>85％，HPLC測(cè)定1用作抗肝纖維化活性研究。此外，探索了HSCCC分離純化TPs的前期工藝條件，為聚戊烯醇分離純化提供新的方法。(4)在硅膠柱色譜分離純化的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步采用制備型HPLC分離純化聚戊烯醇單體，并借助uV、IR、1HNMR和”CNMR等常規(guī)波譜手段對(duì)其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，