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《鴨坦布蘇病毒與鴨瘟病毒二重RT-PCR檢測方法的建立.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)JOURNAL0FSOUTHERNAGRICuIJTURE2014，45(2)：314—317ISSN2095一l19l：CODENNNXAABhttp：，，www．州[nyxb．cnDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．2．314鴨坦布蘇病毒與鴨瘟病毒二重RT—PCR檢測方法的建立張艷芳，謝芝勛+，謝麗基，劉加波，龐耀珊，鄧顯文，謝志勤，范晴，羅思思(廣西獸醫(yī)研究所／廣西畜禽疫苗新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧530001)摘要：【目的】建立可同時(shí)檢測鴨坦布蘇病毒(Ducktembusuvims，DTMIⅣ)與鴨瘟病毒(Duc
2、kplaguevims，DPV)的二重RT—PcR，為有效防控DTMuv與DPv提供技術(shù)支撐?！痉椒ā扛鶕?jù)GellBaIll(中DTMIⅣE基因和DPv【JI德因的保守序列，設(shè)計(jì)合成兩對引物，優(yōu)化反應(yīng)體系條件，并通過特異性、敏感性試驗(yàn)評價(jià)建立的二重RT-PcR?！窘Y(jié)果l優(yōu)化后的二重RT．PcR反應(yīng)體系為：2×PcRMix12．5仙L，其中DTM【Jv上、下引物各o．5斗L，DPV上、下引物各O．5肛L，混合模板2．0斗L，d擔(dān)20補(bǔ)足至25．0斗L；最佳反應(yīng)程序：95。C預(yù)變性5mill；95℃1min，54．4℃lmin，72℃1min，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72
3、℃延伸10min。該方法對DTMIⅣ與DPV的檢測敏感性分別達(dá)500和600fg，但對鴨源新城疫病毒、鴨肝炎病毒、番鴨細(xì)小病毒、鴨圓環(huán)病毒、H9亞型禽流感病毒和減蛋綜合癥病毒等病原體不敏感?！窘Y(jié)論】建立的二重RT．PCR可用于DTMuV與DPV感染的快速鑒別診斷。關(guān)鍵詞：鴨坦布蘇病毒；鴨瘟病毒；二重RT-PcR；特異性；敏感性中圖分類號：s858．32文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：2095—1191(2014)02—0314—04DeVelopmentofaduplexRT—PCRassayfordetectionofducktemDUSUVlrUSanndUCKp
4、lagUeVlrUS●1●ZHANGYan—fang，XIEZhi—xun+，XIELi-ji，UUJia—bo，PANGYao—shan，DENGXian—wen，XIEZhi—qin，F(xiàn)ANQing，LU0Si—si(Guan鰣VeterinaryResearchInstitute，Guan鰣KeyLabomtoryofAnimalVaccinesandDiagIlostics，Nanning530001，China)Abstract：【0bjective】AduplexRT-PcRassayfordetectingbothducktembusuvirus
5、(DTMuV)andduckplaguevimswasdevelopedtopmvidetechnicalsupPonfbre玨ectivecontmlofDTMUVandDPV．【Method】AccordingtothegenesequencesofducktembusuvirusEgeneandduckplaguevilllsUL6geneinGenBank，twosetsofspecificprimersweredesigned．ThedupkxPCRassaywasdevelopedthIDughoptimizationofreaetioncondi
6、tionsandvalida“onofspecifieity，sensitivityandrepetitivenessofthemethod．【Result】TheoptimizedRT—PCRreactionsystemwas2×PCRMix12．5斗L，ofwhichtupstI．eamanddownstIeampdmerofDTMUVandDPVwas0．5斗Leach．Themixedtemplatewas2．0斗Landaddedto25．0斗LwithddH20．Theoptimalreactionpmcedurewas95℃initialdena
7、tumtionfor5min，95℃for1min，54．4ccfor1min，72℃for1minwith35cyclesand72℃extensionfor10min．7Ihesensitivityoftheassaywas600fgforducktembusuvimsand500fgforduckplaguevims，butitwasnotsensitivetootherduckpathogens，suchasducknewcastlediseasevims，duckhepatitisvirus，Muscovyduckparvovims，duckcirc
8、ovims，H9subtypeavia
