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《大豆RACK1基因RNAi載體構建及植株轉化.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、南方農(nóng)業(yè)學報JournalofSouthernAgrieuhure2014，45(6)：944—949ISSN2095—1191；CODENNNXAABDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．6．944大豆RACKI基因RNAi載體構建及植株轉化李大紅1，劉喜平1，甄萍萍2(1黃淮學院生物工程系，河南駐馬店463000；2臨邑縣農(nóng)業(yè)局，山東臨邑251500)摘要：【目的】篩選大豆RACKl基因的RNAi突變體，為研究RACKl基因在大豆生長發(fā)育過程的調控作用提供依據(jù)。【方法】采用RT—PCR克隆大豆葉片RACKl基因核心保守序列片段，以植物表達載體pCAMBIA
2、l301為基本載體，構建抑制大豆RAc圈基因表達的RNAi載體。通過農(nóng)桿菌介導轉入大豆子葉節(jié)，經(jīng)潮霉素篩選轉基因植株，利用PCR、Southernblot及RT—qPCR進行轉基因植株檢測?！窘Y果】克隆獲得大豆RACKl基因核心保守序列片段432bp；將該基因片段連接：至IjpCAMBIAl301表達載體內含子兩側，通過酶切分析，RNAi載體構建正確。通過農(nóng)桿菌介導，將該載體轉入大豆中黃13號，獲得23個轉基因大豆株系；經(jīng)PCR和Southernblot檢測，確定大豆RACKl基因RNAi片段已融合到大豆基因組中。經(jīng)定量RT—qPCR分析，不同轉基因大豆株系RACKl基因mRNA的表達量具
3、有明顯差異，其在株系5的表達量最高，為對照的68．5％；株系7最低，降至對照的19．9％?！窘Y論】成功構建了大豆RACKlRNAi表達載體并導人大豆基因組中，獲得23個農(nóng)桿菌介導的RACKlRNA干擾表達的大豆轉基因植株，為研究RACKl基因在大豆生長發(fā)育過程中的功能和作用奠定了基礎。關鍵詞：大豆；RACKl；RNAi；載體構建；Southernblot；RT—qPCR中圖分類號：$565．1文獻標志碼：A文章編號：2095—1191(2014)06—0944—06ConstructionofRNAivectorcarryingRACKIgeneandtransformationinsoy
4、beanLIDa—hong1．LIUXi—ping1．ZHENPing—pin92(1DepartnlentofBiologicalEngineering，HuanghuaiUniversity，Zhumadian，Henan463000，China；2AgriculturalBureauofLinyiCounty，Linyi，Shandong251500，China)Abstract：【Objective】TheRNAinmtantofsoybeanRA皤1genewasscreenedinordertoprovidereferencesforstudyingregulationrole
5、ofRACKjgeneintheprocessofsoybeangrowthanddevelopment．【Method]Theconservedse—quenceofRACKlinsoybeanleafwasclonedbyRT—PCR．ARNAiexpressionvectortoinhibitRACKlexpressionwasconstructedbyusingplantexpressionvectorpCAMBIAl301．RACKlgenewastransterredintoeotyledonarynodeofsoybeanZhonghuang13viaAgrobacteriu
6、m——mediatedtranstbmlationmethod．TransgenicseedlingswasscreenedbyhygromycinandwasdetectedbyPCR，SouthernblotandRT—PCR．【Result】TheclonedsoybeanRAG圈genefragmentwas432bp．ThegenefragmentwasconnectedtobothsidesofintroninexpressionvectorpCAMBIAl301．ThroughrestrictionenzynledigestionanalysisandDNAsequencin
7、g．itshowedthatalltherecombinantplasmidswereaccordingwiththedesignandRNAivectorwasconstructedcorrectly．ByA,grobacterium—mediated．theconstructedRNAivectorwastransf()mlatedintosoybeanZhonghuang13and23transgeniclines
