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《淫羊藿苷誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectofIcariineontheformationsofMesenchymalstemcellsofHumanumbilicalcordto0steoblasts，BvZhangFan，一SupervisorProf．WuXuejianDepartmentoforthopedicsTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay2011y{原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下
2、，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者：死q陟日期跏f／，年j月佃日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位
3、論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。。學(xué)位論文作者：歹愛(ài)寸見(jiàn)日期：乃f／年歲月‘，Ik■熏I；l11,}$。；謄摘要淫羊藿苷誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究碩士研究生：張帆導(dǎo)師：吳學(xué)建鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科河南鄭州450052背景和目的人臍帶問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離及定向培養(yǎng)是目前組織工程學(xué)的熱點(diǎn)。研究淫羊藿苷對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)作用，以及誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞分化的可能。嘗試為骨組織工程找到一個(gè)新的體外誘導(dǎo)成骨細(xì)胞的方案。方法無(wú)菌條件下取39"'40周健康產(chǎn)婦
4、剖腹產(chǎn)后lh的臍帶(均征得產(chǎn)婦及其家屬同意)，去除外膜及血管后，將臍帶組織剪碎，接種于培養(yǎng)瓶中。采用貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)并傳代。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)情況，免疫細(xì)胞化學(xué)染色法鑒定細(xì)胞表面抗原標(biāo)志物(CD34，CD44，CDl05，CD45)。取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第3代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞生長(zhǎng)至80％．90％融合時(shí)分為2組進(jìn)行誘導(dǎo)分化，空白對(duì)照組加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組加入淫羊藿苷和基礎(chǔ)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)并檢測(cè)成骨細(xì)胞標(biāo)志物ALP、堿性磷酸酶染色、堿性磷酸酶活性測(cè)定、鈣化結(jié)節(jié)的檢測(cè)。將結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果臍帶問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞原代細(xì)胞培養(yǎng)4天后，可見(jiàn)組織塊周?chē)?/p>
5、細(xì)胞成放射狀生長(zhǎng)，類(lèi)似成纖維細(xì)胞，形態(tài)均一，貼壁狀態(tài)。培養(yǎng)15天后，培養(yǎng)瓶有80％．95％融合，按照l(shuí)：2或者1：3的比率傳代，傳代后4h細(xì)胞貼壁，1-6代細(xì)胞12h貼壁率>85％，24h貼壁率可達(dá)90％。6一-8d細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底，細(xì)胞融合率可達(dá)100％。傳代I摘要細(xì)胞在生長(zhǎng)的過(guò)程中呈現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)。第3代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞免疫組化染色，顯示表面標(biāo)CD44、CDl05強(qiáng)陽(yáng)性，CD34、CD45陰性，檢測(cè)結(jié)果符合人UCMSCs的特征。誘導(dǎo)培養(yǎng)后形態(tài)學(xué)檢測(cè)：實(shí)驗(yàn)組可見(jiàn)大量臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞由漩渦狀排列向多角形，立方形細(xì)胞發(fā)展。空白對(duì)照組干細(xì)胞無(wú)明顯變化。成骨性檢測(cè)：隨著培養(yǎng)
6、天數(shù)的增加，實(shí)驗(yàn)組誘導(dǎo)后細(xì)胞液中成骨細(xì)胞特征性堿性磷酸酶強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)并且有鈣沉積。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)ALP含量與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0．001)，實(shí)驗(yàn)組鈣化結(jié)節(jié)染色強(qiáng)陽(yáng)性。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)證明了人臍帶中可以提取干細(xì)胞并在體外采用組織塊貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)，傳代，增殖。在一定情況下可以向成骨誘導(dǎo)。在向成骨誘導(dǎo)方面，淫羊藿苷對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖和成骨分化具有促進(jìn)作用，可作為骨性誘導(dǎo)因子，在臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療骨缺損，骨壞死方面有著廣闊的前景。關(guān)鍵詞臍帶；間充質(zhì)干細(xì)胞；淫羊藿苷；成骨細(xì)胞U、＼I：一：引卜卜l：¨㈡f一AbstractEffectofIcariineontheforma
7、tionsofMesenchymalstemcell,,ofhumanUmbilicalcordto0steoblast：stemcellso11UilicalcortoUste01astsDepartmentoforthopedics，TheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityZhengzhouHenan450052backgroundand0bjectiveSeparationofmesenchymalstemcellsobtainedfromhumanumb
