精卵受精原核觀察操作常規(guī).doc

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1、精卵受精原核觀察操作常規(guī)1.在精子卵子授精后14-19小吋期間觀察原核。2.操作環(huán)境：百級凈化環(huán)境屮操作，配備溫度37°C加熱板的體視鏡下觀察。3.挑選合適尖吸管用于剝離“受精卵"外層卵丘細(xì)胞（可實(shí)驗自制或者購買剝卵針），尖吸管內(nèi)直徑稍微大于卵母細(xì)胞的直徑。使用尖吸管前請在體視鏡觀察尖吸管頭部是否完好和內(nèi)直徑是否合適（管內(nèi)直徑120微米左右）。4.取卵當(dāng)日為毎個IVF/ICSI患者準(zhǔn)備胚胎培養(yǎng)皿，每個培養(yǎng)皿周I韋

2、用卵裂液（如G1,或Gm）做?10個微滴，屮問3?4個微滴備沖洗，每個胚胎培養(yǎng)微滴用液約15ul

3、,其上蓋滿礦物油。將準(zhǔn)備好的胚胎培養(yǎng)IU1放入CO2培養(yǎng)箱內(nèi)平衡過夜。5?了解患者過夜精子的情況：如未提示過夜精子培養(yǎng)液屮未見較多密集的顆粒狀物，可以開始觀察原核操作；如提示過夜精子培養(yǎng)液屮可見較多密集的顆粒狀物，可能發(fā)生“受精卵”污染，請最后觀察，具體操作見補(bǔ)充說明。6.準(zhǔn)備以上條件后，從培養(yǎng)箱取出患者授精的4孔培養(yǎng)皿，與實(shí)驗室記錄單核對夫妻雙方名字及核對所觀察的的“卵子”數(shù)7.RT受精卵的原核檢查，需先剝除外層卵丘細(xì)胞。使用前尖吸管可用授精培養(yǎng)液體潤洗下。體視鏡下，尖吸管在授精孔吹吐“受精卵S剝離“受精卵

4、”外層卵丘細(xì)胞。開始吋，先剝離一個“受精卵”，如順利，之后可以3-4個受精卵一起剝離。8.原核檢查：剝離顆粒細(xì)胞后，使用尖吸管將卵母細(xì)胞轉(zhuǎn)入備好的胚胎培養(yǎng)皿內(nèi)（ICSI受精卵直接轉(zhuǎn)入胚胎培養(yǎng)皿內(nèi)），在體視鏡下（80X）進(jìn)行原核觀察,如解剖鏡下顯示不清需在倒置鏡下（200X）下觀察。9?將受精卵在中間3個培養(yǎng)滴進(jìn)行清洗后,按2PN,IPN,0PN（無原核,可為2pb,MID,MI,GV,3PN/多PN（3個以上原核）等受精情況情況進(jìn)行分類放置，每個培養(yǎng)滴放1-5枚胚胎（如果胚胎數(shù)超過30建議使用2個及以上培養(yǎng)皿

5、）。標(biāo)記核對患者夫妻雙方名字于胚胎培養(yǎng)的小皿，與患者四孔培養(yǎng)皿一直放入培養(yǎng)箱，位置與原來相同。作好受精情況記錄，記錄包括受精情況，位置，培養(yǎng)液，觀察吋間，操作者。10.如果“受精卵"剝離和觀察是在空氣環(huán)境下，此操作過程不能超過十分鐘。11?一位患者受精觀察結(jié)束后銷毀使用過的尖吸管，開始下一位患者的觀察。補(bǔ)充說明1.常規(guī)受精失敗或常規(guī)受精率低于20%：觀察未受精卵成熟情況；了解過夜精子的情況，及四孔精子情況，判斷是否補(bǔ)救ICSI,和是否發(fā)生污染。2.補(bǔ)救ICSI：如果常規(guī)受精失敗，或受精率低于20%o?原則是盡

6、可能保證患者有一次胚胎移植機(jī)會。?常規(guī)受精完全失敗視卵成熟情況和卵子質(zhì)量好壞決定是否進(jìn)行補(bǔ)救ICSI。?受精率低于20%：如果正常受精2PN22,受精卵形態(tài)正常，可以考慮不補(bǔ)救ICSL如果正常受精2PN<2,月-有5個以上正常形態(tài)Mil,建議補(bǔ)救ICSL?及時補(bǔ)救ICSL?如補(bǔ)救，第二天請先觀察補(bǔ)救ICSI受精情況。3.污染問題：污染提示：?過夜精子培養(yǎng)液屮見較多密集的顆粒狀物。?受精的4孔培養(yǎng)液有渾濁的情況發(fā)生。?常規(guī)受精完全沒有受精。污染觀察：倒置顯微鏡下（200X或400X）下觀察確認(rèn)。污染處理：第一種

7、情況:4孔培養(yǎng)液屮布滿大量的顆粒狀物，精子大多數(shù)不活動，顆粒細(xì)胞貼壁生長差，可以當(dāng)日行精液及胚胎培養(yǎng)液的細(xì)菌培養(yǎng)鑒定及藥敏實(shí)驗。第二種情況:如上述情況不是很明顯，到D3移植口再觀察決定。這種情況下如果常規(guī)完全未受精可以行補(bǔ)救ICSLD3觀察：?胚胎培養(yǎng)滴屮未發(fā)現(xiàn)顆粒，移植。?胚胎培養(yǎng)滴屮發(fā)現(xiàn)顆粒，不移植，精液及胚胎培養(yǎng)液的細(xì)菌培養(yǎng)鑒定及藥敏實(shí)驗。?胚胎培養(yǎng)滴屮難以確定顆粒，囊胚培養(yǎng)后決定？胚胎冷凍，胚胎胚胎培養(yǎng)液的細(xì)菌培養(yǎng)鑒定？初步判斷污染來源：?提示精子來源污染；過夜精子培養(yǎng)液有明顯大量顆粒，培養(yǎng)卵母細(xì)胞的

8、四孔屮間背景干凈，浸洗卵母細(xì)胞培養(yǎng)皿背景干凈。?提示卵子來源污染；過夜精子培養(yǎng)液未見較多密集的顆粒狀物，且精子活力良好，培養(yǎng)卵母細(xì)胞的四孔屮間可見較多密集的顆粒狀物，浸洗卵母細(xì)胞培養(yǎng)皿背景可見較多密集的顆粒狀物。