甾醇檢驗操作規(guī)程.pdf

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1、甾醇檢測標準操作規(guī)程1.試劑：1.1膽固醇1.2標準品菜籽甾醇，SG，96.9%菜油甾醇，Sigma，min65%豆甾醇，Sigma，95%谷甾醇，Sigma，97%1.3乙酸乙酯2.儀器：氣相色譜檢測器：氫焰離子檢測器色譜柱：HP-5或DB-1HT3.色譜條件：色譜柱溫度：270℃進樣口溫度：300℃檢測器溫度：300℃載氣和流速：氮氣，35ml/min4.檢驗步驟：4.1標準品溶液的配制4.1.1內(nèi)標液A的配制（膽固醇2mg/ml）?精確稱取20.0mg的內(nèi)標物膽固醇于10.0ml的容量瓶內(nèi)?加入約8ml乙酸乙酯?超聲處理至膽固醇完全

2、溶解?用乙酸乙酯定容4.1.2甾醇標準品溶液B的配制（菜籽甾醇，菜油甾醇，豆甾醇，β-谷甾醇）?精確稱取各甾醇標品（菜籽甾醇，菜油甾醇，豆甾醇，β-谷甾醇）80.0mg于四個10.0ml的容量瓶中?分別加入約8ml的乙酸乙酯?超聲處理至固體顆粒完全溶解?用乙酸乙酯定容4.1.3工作標樣溶液C的配制?分別吸取甾醇標準溶液B（菜籽甾醇，菜油甾醇，豆甾醇，β-谷甾醇）各1.0ml混合得到混合甾醇標準溶液D?吸取混合甾醇標準溶液D1.0ml與1.0ml的內(nèi)標液A混合得到工作標樣C4.1.4待測樣品溶液1（定量測定）的配制?精確稱取待測樣品20.0

3、mg于10.0ml容量瓶中?加入約8ml的乙酸乙酯?超聲處理至固體物質完全溶解?用乙酸乙酯定容?吸取1.0ml待測樣品溶液與1.0ml的內(nèi)標液A混合4.1.5待測樣品溶液2（定性測定）的配制?精確稱取待測樣品20.0mg于10.0ml容量瓶中?加入約8ml的乙酸乙酯?超聲處理至固體物質完全溶解?用乙酸乙酯定容4.2檢測步驟?如3中給定的溫度等條件對氣象色譜的色譜柱、進樣器和檢測器進行設置?進空白樣1μl?進1μl的工作標樣C，確定各甾醇單體的保留時間各甾醇組分相對于內(nèi)標膽固醇的相對保留時間為：菜籽甾醇約為1.06，菜油甾醇約為1.18，豆

4、甾醇約為1.25，β-谷甾醇約為1.38.（色譜柱型號為DB-1HT）?重復進兩針工作標樣?進待測樣溶液1?進待測樣溶液2?對獲得的氣相色譜圖進行定量計算4.3數(shù)據(jù)處理及結果計算用內(nèi)標法分析計算各甾醇的百分含量4.3.1定量計算Kstandard的值為工作標樣C的色譜圖中的各甾醇組分（菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇）與內(nèi)標物的峰面積之比，即：AstandardKstandard=AISKsample的值為待測樣1的色譜圖中的各甾醇組分（菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇）與內(nèi)標物的峰面積之比，即：AsampleKsample=

5、AIS則通過下式可計算出甾醇中各組分的含量：A[%]=Ksample/Kstandard×РKsample--待測樣1的相關系數(shù)Kstandard--標準品的相關系數(shù)Р--所用的菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇標準品的百分含量4.3.2待測樣組成成分的測定對由待測樣2得到的氣相色譜圖中除去溶劑峰的所有峰進行歸一化基于峰面積確定待測甾醇的組成成分