丙型肝炎病毒功能基因在CHO細(xì)胞中的表達(dá)研究.pdf

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1、!"卷#期生物工程學(xué)報(bào)’()*!"+(*#!$$%年&&月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12+(,-./-0!$$%!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!丙型肝炎病毒功能基因在!"#細(xì)胞中的表達(dá)研究$%&’())*+,-,./01.2+304(51,60*+,-78’+0(*,)+3"(&-0*0*)!9*’1)*,!"#!(77:*,(郭佳，鄢然，徐國(guó)東，鄭從義"TUV536，W:+167，XUT8(OF(7C674Y

2、ER+TH(7COW3"武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，病毒學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，武漢M"$$%!3/+/%4%25+6(*+/(*2(-7#*(,(12，!(,,%1%(-5#-%30#0%$0%&，8)"+$9$#:%*&#/2，8)"+$M"$$%!，!"#$+摘要丙型肝炎病毒（EH’）與宿主細(xì)胞因子的相互作用已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。近期研究已經(jīng)證實(shí)EH’的感染對(duì)宿主多種途徑中基因的轉(zhuǎn)錄均能產(chǎn)生影響。為了進(jìn)一步研究究竟是EH’中的哪些功能基因在與特定細(xì)胞因子的相互作用中起主導(dǎo)作用，構(gòu)建了分別含有EH’H(0-、R&、R!、;%、+

3、Z!、+Z"、+ZM:、+ZMJ、+ZL:和+ZLJ基因的真核表達(dá)質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞HEVO[&中，在TM&I的選擇壓力下篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)EH’單個(gè)蛋白的細(xì)胞系（&$株）。GH1和1?OGH1可分別從穩(wěn)定細(xì)胞系中檢測(cè)到相應(yīng)的EH’基因的F+:和.1+:，凍存和復(fù)蘇不會(huì)造成EH’基因的丟失。-@<-07O/)(<檢測(cè)到穩(wěn)定細(xì)胞系中表達(dá)R&，R!和+ZLJ蛋白，說(shuō)明EH’基因在HEVO[&中已經(jīng)形成穩(wěn)定表達(dá)。薄層層析（?]H）結(jié)果顯示，含有不同EH’基因的穩(wěn)定傳代細(xì)胞系中，UFGO葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶（UTHT）活性均發(fā)

4、生了不同程度的變化，其中R!和;%的表達(dá)使胞內(nèi)UTHT的活性提高了約&倍，+Z!和+ZL:則使UTHT的酶活提高了約$^#倍。該穩(wěn)定細(xì)胞系的建立為研究病毒與宿主因子的相互作用及藥物篩選奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞丙型肝炎病毒，真核表達(dá)，穩(wěn)定細(xì)胞系，UFGO葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶中圖分類號(hào)_%I#文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:文章編號(hào)&$$$O"$#（&!$$%）$#O$KKLO$L;<)0’-601-2-7<)9，<>-37<-062<3(7@/--;6<3<3@H,308@（EH’）C-7-@674<>->(@<2-))D62<(0@A-

5、0-<>-D(28@(D<>3@D3-)4*H-))D62<(0@37<>-43DD-0-7-.326);6<>A69A-0-6;;0(,-4<(/-37<-0D-0-4A>-7EH’37D-2<3(7*?(.6B-@80-A>32>EH’C-7（-@）A6@<>-.6‘(0D62<(048037C<>-37<-062<3(7;0(2-@@，<-7-8B609(<32-Q;0-@@3(7;)6@.34@2(7<63737C43DD-0-7

6、Z"，+ZM:，+ZMJ，+ZL:674+ZLJA-0-<067@D-2<-437<(<>-HEVO[&2-))@0-@;-2<3,-)9*?>-7<-7@<6/)-2-)))37-@-Q;0-@@37C43DD-0-7-@-)-2<3,-;0-@@80-(DTM&I*F+:674.1+:(D<>-EH’C-7-@A-0-/(<>4-<-2<-4/9GH16741?OGH10-@;-2<3,-)937<>-2(00-@;(7437C@<6/)-

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