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1、第36卷第1期水產(chǎn)養(yǎng)殖Vo1-36，NO．12015年1月1日J(rèn)ournalofAquacultureJan．1，2015doi：10．3969~．issn．1004-2091．2015．01．008繁i薰丁淑燕一，李躍華，黃亞紅z，許志強(qiáng)，葛家春(1．江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，江蘇南京210017；2．南京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江蘇南京210093)摘要：本文對(duì)刀鱭精子的超低溫冷凍保存技術(shù)進(jìn)行了研究。以解凍后精子的運(yùn)動(dòng)力為參數(shù)，分別探討了不同的稀釋液、不同種類不同濃度的保護(hù)劑、不同的平衡時(shí)間以及不同的稀釋比例對(duì)刀鱭精子進(jìn)行超低溫冷凍保存的保護(hù)效果。結(jié)果顯示：采用D一15稀釋液
2、，將精液和稀釋液按1：2稀釋，4℃平衡20min，加入10％DMSO，混勻后液氮面上方6cm處平衡10min，接著在液氮面上平衡5min，最后投入液氮中保存，一周后，液氮蒸氣中平衡5min，37℃水浴解凍，活力效果最佳，達(dá)70％左右。關(guān)鍵詞：刀鱭；精子；超低溫保存中圖分類號(hào)：Q173文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1004—2091(2014)10—0032—03刀鱭(Coiliaectenes)，又名長(zhǎng)頜鱭，與七絲鱭、1．1實(shí)驗(yàn)材料短頜鱭、鳳鱭在水產(chǎn)市場(chǎng)上統(tǒng)稱為鳳尾魚。以其肉本研究中刀鱭樣品形態(tài)正常、生長(zhǎng)良好、無疾質(zhì)細(xì)嫩、鮮肥、時(shí)令性強(qiáng)而著名，是長(zhǎng)江中下游主要病、達(dá)到性成熟，
3、于洄游期間采自長(zhǎng)江南京段潛州經(jīng)濟(jì)魚類之一。長(zhǎng)江口曾是我國刀鱭最大的河口漁江段，因刀鱭出水即死，所以離水就要解剖取精巢場(chǎng)，20世紀(jì)70年代長(zhǎng)江下游刀鱭最高產(chǎn)量達(dá)3945采集精子。t，后來由于高強(qiáng)度捕撈、航道建設(shè)和水質(zhì)污染等原1．2精液的采集因，刀鱭自然資源逐年減少，已不能形成魚汛，資源解剖取精巢于4℃冰箱中預(yù)冷的干凈研缽中每況愈下，已到了岌岌可危的地步[1-2]，因此保護(hù)刀剪碎。所采集的精液要求乳白色，無血污、糞便污鱭種質(zhì)資源、防止物種滅絕勢(shì)在必行。染。先用細(xì)口吸管吸一滴水于載玻片上，對(duì)準(zhǔn)視野，超低溫保存是一種有效的，并能長(zhǎng)期保存鮮精然后用針尖挑取上述精液立即于顯微鏡下邊
4、攪勻的方法。迄今為止約有200多種海淡水魚類被用于邊觀察其活力，大于80％者用于冷凍保存。超低溫保存研究，而關(guān)于刀鱭精子的超低溫保存1．3精子冷凍研究卻鮮有報(bào)道，本文就刀鱭精液超低溫冷凍保存將精液與稀釋液按一定比例混合，4℃平衡后，進(jìn)行研究，擬建立一套刀鱭超低溫冷凍保存方法，輕微吸打，取上清液與含有保護(hù)劑的同種稀釋液等以期為刀鱭繁殖生物學(xué)、遺傳育種、種質(zhì)資源保護(hù)體積混合，分裝，接著進(jìn)行冷凍。冷凍方法：首先在等提供技術(shù)支持。液氮面上方6cm處平衡10min，接著在液氮面上l材料與方法平衡5min，最后投入液氮中。資助項(xiàng)目：江蘇省科研院所社會(huì)公益研究與服務(wù)專項(xiàng)(BM2004
5、718，BM2006703)；江蘇省水產(chǎn)j項(xiàng)T程項(xiàng)目(K2006—3)作者簡(jiǎn)介：丁淑燕，(1978一)，女，助研，研究方向：淡水水生生物精子超低溫冷凍保存技術(shù)．E—mail：dshy7869@sina．corn第1期丁淑燕，等刀鱭精子超低溫冷凍保存技術(shù)的研究33刀鱭精子冷凍保存研究中，比較了不同稀釋液高達(dá)65％左右，結(jié)果見表2。(魚用壬氏液、Kurokura一1、D一15、D一20)、不同種類表2精液稀釋倍數(shù)對(duì)保存效果的影響不同濃度的保護(hù)劑(DMSO、甘油、甲醇)、不同的平衡時(shí)間(0、10、20、30min)以及不同的稀釋比例(1：2、1：5、1：10、1：20)對(duì)刀鱭
6、精子超低溫冷凍保存效果的影響。1．4凍精解凍精子在液氮中保存一周后，將其從液氮中取出，與液氮口處平衡5min后，再于37℃水浴中快速解凍直至融化，立即放人顯微鏡視野下用SM激2．5驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)活觀察其運(yùn)動(dòng)力。按照上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用D一15稀釋液，將新采2結(jié)果與分析集的精液立即和稀釋液按1：2稀釋，4c(=平衡202．1冷凍保存稀釋液配方篩選rain，加入10％DMSO，混勻后液氮面上方6cm處應(yīng)用上述四種冷凍稀釋液對(duì)刀鱭精子進(jìn)行冷平衡10rain，接著在液氮面上平衡5min，最后投入凍保存。在四種稀釋液中，D一15的凍后成活率最液氮中保存，一周后，液氮蒸氣中平衡5min，
7、37℃高，達(dá)70％，壬氏液、Kurokura一1、D一20的凍后成活水浴解凍，活力達(dá)70％左右。率分別為50％、60％和40％。因此刀鱭精子冷凍保3討論存的最適稀釋液為D一15。3．1稀釋液對(duì)保存效果的影響2．2抗凍保護(hù)劑的篩選稀釋液能為精子提供一個(gè)合適的生理環(huán)境，延用Kurokura一1作稀釋液，比較了三種抗凍劑長(zhǎng)其在體外的存活時(shí)間，并防止精子被激活。選擇(DMSO、G1V、Meth)的冷凍保存效果，并對(duì)每種抗凍合適的稀釋液是成功保存魚類精子的一個(gè)重要因劑的濃度進(jìn)行了篩選，結(jié)果見表1，顯示：DMSO凍子。在本研究中四種稀釋液被用來比較刀
