藜豆種質(zhì)資源遺傳多樣性的ISSR分子標(biāo)記分析-論文.pdf

《藜豆種質(zhì)資源遺傳多樣性的ISSR分子標(biāo)記分析-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、第41卷第6期江漢大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)Vo1．41NO．62013年12月J．JianghanUniv．(Nat．Sci．Ed．)Dec．2013藜豆種質(zhì)資源遺傳多樣性的ISSR分子標(biāo)記分析張鳳銀，戴希剛，潘磊(江漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，湖北武漢430056)摘要：利用ISSR標(biāo)記構(gòu)建了9份藜豆種質(zhì)的指紋圖譜，并對(duì)其遺傳多樣性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，從35條引物中篩選出8條重復(fù)性好的多態(tài)性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，共擴(kuò)增出64條帶，其中多態(tài)性條帶50條，多態(tài)性比例為78．1％。應(yīng)用其中3條多態(tài)性ISSR引物(UBC889、UBC812、UBC825)的12條特異性條帶，可以有效區(qū)

2、分供試的9份藜豆種質(zhì)資源。藜豆種質(zhì)問(wèn)的遺傳相似系數(shù)變化范圍在0．47～0．97之間。利用UPGMA聚類分析，在相似性系數(shù)為0．73處可將9個(gè)藜豆種質(zhì)資源劃分為3個(gè)類群，其親緣關(guān)系與種質(zhì)地理來(lái)源之間存在一定關(guān)聯(lián)性。關(guān)鍵詞：藜豆；種質(zhì)資源；遺傳多樣性；ISSR；相似系數(shù)；聚類分析中圖分類號(hào)：$643．9文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：l673．0143(2o13)06—0100—05藜豆(Stizolobiumcochinchinensis)(2X=2N=本研究利用ISSR標(biāo)記對(duì)9份藜豆種質(zhì)資源進(jìn)22)，別名貓豆、狗爪豆等，屬豆科藜豆屬一年生行遺傳多樣性分析，對(duì)相應(yīng)資源建立特異性

3、的指草質(zhì)藤本植物，具有食用?、藥用、家畜飼料紋圖譜，以期為科學(xué)合理地保護(hù)和利用藜豆種質(zhì)等多種用途。該種原產(chǎn)于熱帶及亞熱帶地區(qū)，在資源提供理論依據(jù)和技術(shù)支持，為利用分子標(biāo)記我國(guó)的分布區(qū)域包括廣東、海南、廣西、四川、貴輔助育種手段培育藜豆新品種奠定基礎(chǔ)。州、湖北和臺(tái)灣等省區(qū)。前人對(duì)藜豆的研究主要1材料與方法集中在栽培生理及左旋多巴含量、提取方法等方面，而對(duì)其遺傳多樣性方面的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。1．1材料分子標(biāo)記是分析種質(zhì)遺傳多樣性的有效手9份藜豆種質(zhì)資源LD一1、LD一2、LD一3、段，與形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)和蛋白質(zhì)標(biāo)記相比較，LD一4、LD一5、LD～6、LD一7、LD一8、LD一

4、9(分另0記分子標(biāo)記直接以核酸作為研究對(duì)象，在植物體的為1、2、3、4、5、6、7、8、9)作為本研究的試驗(yàn)各個(gè)組織、各個(gè)發(fā)育時(shí)期均可檢測(cè)，不受發(fā)育階材料，其來(lái)源及主要性狀列于表1。對(duì)9份藜豆段、環(huán)境限制，方法可靠，揭示多態(tài)性水平高。種質(zhì)資源進(jìn)行穴盤(pán)育苗，待幼苗長(zhǎng)至2片真葉ISSR(InterSimpleSequenceRepeat，簡(jiǎn)單重復(fù)序時(shí)，每份材料隨即選取5株取其嫩葉備用。列區(qū)間)是1994年由加拿大蒙特利爾大學(xué)的Ziet—1．2DNA提取kiewicz等、在微衛(wèi)星分子標(biāo)記基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的采用改良的CTAB法0提取藜豆基因組一種分子標(biāo)記技術(shù)，結(jié)合了RADP和S

5、SR的優(yōu)DNA。經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)點(diǎn)，具有多態(tài)性高、重復(fù)性好、顯性標(biāo)記、成本較檢測(cè)其質(zhì)量和濃度后，置于一70c《=冰箱保存?zhèn)溆谩５?、模板用量少等特點(diǎn)。目前，該技術(shù)廣泛應(yīng)用1．3PCR擴(kuò)增及檢測(cè)于農(nóng)作物、蔬菜?、果樹(shù)、牧草糾等植物的根據(jù)加拿大哥倫比亞大學(xué)公布的ISSR引物遺傳多樣性、親緣關(guān)系、遺傳作圖、基因定位等序列，由金斯瑞生物科技有限公司合成。利用優(yōu)方面的研究?；腜CR反應(yīng)體系從35條ISSR引物中篩選出擴(kuò)收稿日期：2013—09—22基金項(xiàng)目：湖北省豆類(蔬菜)植物工程技術(shù)研究中心開(kāi)放基金項(xiàng)目(2012一O1)；武漢市科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(2011

6、20822281)；武漢市科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(2013021001010478)作者簡(jiǎn)介：張鳳銀(1964一)，女，副教授，研究方向：園藝植物遺傳育種。2013年第6期張鳳銀，等：藜豆種質(zhì)資源遺傳多樣性的ISSR分子標(biāo)記分析101表1供試藜豆種質(zhì)材料來(lái)源及其主要性狀增條帶清晰、多態(tài)性強(qiáng)和重復(fù)性好的8條ISSR引最佳退火溫度下復(fù)性30S，72oC延伸1min，35個(gè)物(表2)?；?條多態(tài)性ISSR引物分別對(duì)9份循環(huán)，最后于72℃延伸10min，4qC保存。擴(kuò)增藜豆材料進(jìn)行PCR擴(kuò)增。25L反應(yīng)體系中各反產(chǎn)物采用2．0％瓊脂糖凝膠電泳(TBE電泳緩應(yīng)物含量為：20ng模板

7、DNA，2L10×Buffer，沖液，0．5g／LEB)檢測(cè)，在80V恒壓下電泳約1UTaqDNA聚合酶，0．4M引物，0．20mM1h，用DL2000DNAMarker(北京鼎國(guó)昌盛生物dNTPs．PCR擴(kuò)增在PTC一100TM(Bio—Rad，USA)技術(shù)有限責(zé)任公司)作分子量標(biāo)準(zhǔn)，在凝膠成像PCR儀上進(jìn)行，采用touchdown擴(kuò)增程序：94c《=預(yù)系統(tǒng)儀中拍照記錄電泳圖譜。變性5min，然后進(jìn)行下列循環(huán)：94℃變性30S，表2ISSR引物序列及多態(tài)性分析1．4數(shù)據(jù)處理與指標(biāo)計(jì)算UBC889擴(kuò)增的條帶數(shù)最多，為l2條，而引物選取清晰ISSR電泳