RNAi沉默polβ基因部分逆轉(zhuǎn)食管鱗癌細胞順鉑耐藥性.pdf

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1、第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報２０１４年３月第３５卷第３期ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｊｓｍｍｕ．ｃｎ·２７９·ＡｃａｄｅｍｉｃＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｅｃｏｎｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｍａｒ．２０１４，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．３ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１００８．２０１４．００２７９·論著·ＲＮＡｉ沉默ｐｏｌβ基因部分逆轉(zhuǎn)食管鱗癌細胞順鉑耐藥性１２１１唐悅，王黎，柳璐璐，李敏１．鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室，鄭州４５００５２２．鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室，鄭州４５００５２［摘要］目的通過ＲＮＡ干擾（ＲＮＡｉ

2、）技術(shù)沉默ＤＮＡ聚合酶ｐｏｌβ的表達，觀察其對食管癌細胞順鉑（ｃＤＤＰ）耐藥性的影響。方法構(gòu)建靶向ｐｏｌβ基因的ｓｉＲＮＡ重組慢病毒ｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ１、ｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ２及陰性對照載體ｐＲＮＡＴＵ６．２／ＬｅｎｔｉｐｏｌβＣ，將其感染人食管鱗癌順鉑耐藥細胞系ＥＣ９７０６／ｃＤＤＰ，通過ＲＴＰＣＲ、蛋白質(zhì)印跡分析和免疫熒光實驗觀察細胞ｐｏｌβ的表達情況，采用ＭＴＴ法觀察不同濃度順鉑對細胞生長的抑制作用并計算５０％細胞生長抑制所需的藥物濃度（ＩＣ５０）和耐藥指數(shù)（ＲＩ）。結(jié)果靶向ｐｏｌ

3、β的ｓｉＲＮＡ重組慢病毒ｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ１和ｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ２感染ＥＣ９７０６／ｃＤＤＰ后均可下調(diào)ｐｏｌβ的ｍＲＮＡ和蛋白表達水平，其中前者效果更為顯著。順鉑以劑量依賴方式抑制ＥＣ９７０６／ｃＤＤＰ細胞增殖，感染ｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ１、ｐＲＮＡＴＵ６．２／ＬｅｎｔｉｐｏｌβＣ的ＥＣ９７０６／ｃＤＤＰ細胞及未感染ＥＣ９７０６／ｃＤＤＰ細胞對順鉑的ＩＣ５０分別為５５．７１、６２．４１、６３．１１μｇ／ｍＬ，耐藥指數(shù)分別為１３．９、１５．５、１５．７，其中前者與后二者

4、相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。結(jié)論ｐｏｌβ的表達與食管鱗癌細胞系ＥＣ９７０６／ｃＤＤＰ順鉑耐藥性有關(guān)，沉默其表達可部分逆轉(zhuǎn)ＥＣ９７０６／ｃＤＤＰ細胞對順鉑的耐藥性。［關(guān)鍵詞］食管腫瘤；腫瘤抗藥性；順鉑；ｐｏｌβ；ＲＮＡ干擾［中圖分類號］Ｒ７３５．１［文獻標志碼］Ａ［文章編號］０２５８８７９Ｘ（２０１４）０３０２７９０６ＲＮＡｉｓｉｌｅｎｃｉｎｇｏｆｐｏｌβｇｅｎｅｐａｒｔｌｙｒｅｖｅｒｓｉｎｇｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｔｏｃｉｓｐｌａｔｉｎ１，ＷＡＮＧＬｉ２，ＬＩＵＬｕｌｕ

5、１，ＬＩＭｉｎ１ＴＡＮＧＹｕｅ１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５００５２，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５００５２，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｉｌｅｎｃｅｐｏｌβｇｅｎ

6、ｅｂｙＲＮＡｉｔｅｃｈｎｉｑｕｅａｎｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｉｔｓｅｆｆｅｃｔｓｏｎｔｈｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓｔｏｃｉｓｐｌａｔｉｎ（ｃＤＤＰ）．ＭｅｔｈｏｄｓＷｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｉＲＮＡｔａｒｇｅｔｉｎｇｐｏｌβｇｅｎｅｓ．ＴｈｅｔｗｏｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｓｉＲＮＡｔａｒｇｅｔｉｎｇｔｈｅｐｏｌβｇｅｎｅｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎａｔｅｄａｓｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ

7、１ａｎｄｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ２，ａｎｄｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｖｅｃｔｏｒａｓｐＲＮＡＴＵ６．２／ＬｅｎｔｉｐｏｌβＣ；ｔｈｅｙｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｉｎｆｅｃｔＥＣ９７０６／ｃＤＤＰｃｅｌｌｓ，ｗｈｉｃｈｗａｓｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｃＤＤＰ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｏｌβｗａｓｔｈｅｎｅｘａｍｉｎｅｄｂｙＲＴＰＣＲ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇａｎｄｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．ＭＴＴｗａｓｕｓｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｃＤＤＰ；ｔｈｅＩＣ５０

8、ｏｆｃＤＤＰａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｅｘ（ＲＩ）ｗｅｒｅｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＢｏｔｈｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉｐｏｌβ１ａｎｄｐＲＮＡＴＵ６．２／Ｌｅｎｔｉ