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1、第35卷第4期河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)Vol_35．No．42014年8月JournalofHenanUniversityofTechnology(NaturalScienceEdition)Aug．2014文章編號(hào)：1673—2383(2014)04—0001—05網(wǎng)絡(luò)出版網(wǎng)址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／41．1378．N．20140826．0928．001．html網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2014—8—269：28：25大豆球蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立布冠好，朱婷偉，陳復(fù)
2、生，張楠，劉昆侖，張麗芬(河南工業(yè)大學(xué)糧油食品學(xué)院，河南鄭州450001)摘要：建立了大豆球蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)法(ELISA)，為食品中主要的大豆蛋白過敏原的檢測(cè)提供技術(shù)基礎(chǔ)．以純品大豆球蛋白免疫新西蘭大白兔，自制得到兔抗大豆球蛋白的多克隆抗體，并以大豆球蛋白包被抗原、自制抗體作為一抗、辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG為酶標(biāo)二抗，四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色液為底物，建立了大豆過敏原中大豆球蛋白的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法．確定了抗原的包被濃度為0．025p~g／mL，一抗最佳稀釋度為1：3200，酶標(biāo)二抗稀釋度為
3、1：10000．檢測(cè)結(jié)果達(dá)到板內(nèi)誤差3．82％，板間誤差10．22％，在允許的誤差范圍之內(nèi)；其檢測(cè)的線性范圍為0．O1～0．05p~g／mL．結(jié)果表明本試驗(yàn)所建的大豆球蛋白間接ELISA方法具有一定的重復(fù)性和靈敏度，可用于大豆蛋白制品過敏原的檢測(cè)．關(guān)鍵詞：大豆球蛋白；過敏原；多克隆抗體；間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA中圖分類號(hào)：TS201．2文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A0引言過敏原在食物制品中的檢測(cè)是非常困難的，因?yàn)樽儜?yīng)原通常是很微量的，且可以由食物基質(zhì)屏大豆和大豆副產(chǎn)品因?yàn)槠漭^高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和蔽_1]．大豆球蛋白的定量測(cè)定可以通過高效液相色良好
4、的物理化學(xué)性質(zhì)，被廣泛應(yīng)用于食品和飼料譜法進(jìn)行，但該方法耗時(shí)，且需要昂貴的設(shè)備．免工業(yè)中．然而，大豆蛋白長(zhǎng)期以來也被認(rèn)為是食物疫分析方法因其操作簡(jiǎn)單、廉價(jià)、處理樣品量大等過敏原之一．此外，由于大豆蛋白過敏原可能在幼優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用．其中，酶免疫法(ELISA)現(xiàn)齡動(dòng)物及人體內(nèi)引起潛在的過敏反應(yīng)，隨著大豆已應(yīng)用于牛乳蛋白、大豆蛋白的快速檢測(cè)分析中_61．蛋白產(chǎn)品在食品工業(yè)中使用量的增加，大豆蛋白布冠好等I7J已建立了測(cè)定牛乳球蛋白的間接競(jìng)爭(zhēng)致敏性的研究也越來越多?．在大豆中，至少檢測(cè)ELISA方法．Liu等l8建立了競(jìng)
5、爭(zhēng)ELISA方法來檢到21種致敏蛋白，大豆球蛋白(Glycinin)是其中之測(cè)大豆中一伴大豆球蛋白的亞基，得到的方法一，它已被確定為主要的大豆變應(yīng)原【2]．大豆球蛋靈敏度較高．Cucu等[9]基于競(jìng)爭(zhēng)ELISA法來測(cè)定白是由酸性(A。a、Ab、A：、A，、A4、A)和堿性(Ba、食物中大豆過敏原蛋白．本研究意在建立一種間Bb、B、B、B)多肽鏈通過二硫鍵連接組成，其中接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法用于檢測(cè)大豆中主要過敏原大豆每條酸性鏈和堿性鏈的分子質(zhì)量分別為34～44ku球蛋白，為低敏性大豆制品的開發(fā)提供檢測(cè)方法．和20kut，它
6、為11S的主要成分，占總大豆蛋白的19．5％～23．1％，分子質(zhì)量為300～380kut1．據(jù)報(bào)道，1材料與方法大豆球蛋白過敏反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生腹瀉、腸道損害、免疫1．1試驗(yàn)材料功能紊亂等現(xiàn)象l5l，而免疫反應(yīng)的嚴(yán)重程度取決于大豆球蛋白(Glycinin，G3171)，口一conglycinin大豆球蛋白的劑量．(C5868)，酶標(biāo)二抗(HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG，收稿日期：2014—03—14A6154)，弗氏完全佐劑和弗式不完全佐劑：Sigma基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31201293，21176058，3117179
7、0)；公司；新西蘭大白兔：鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提國(guó)家863項(xiàng)目(2013AA102208—5)；河南省教育廳科學(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)供；兔抗Glycinin血清(自制)；牛血清蛋白(BSA)，項(xiàng)目(14B550013)TMB單組份顯色液：北京索萊寶科技有限公司；其作者簡(jiǎn)介：布冠好(1980一)，女，河南洛陽(yáng)人，副教授，博士，研究方向?yàn)槭称返鞍踪|(zhì)資源開發(fā)與利用．他試劑均為分析純．通信作者2河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)第35卷1．2儀器與設(shè)備(pH9．6，50mmol／L碳酸鹽緩沖液)稀釋為0．1、96孔酶標(biāo)板：ComingCo
8、star公司；FC型酶標(biāo)0．05、0．025、0．0125~g／mL，每行一個(gè)稀釋度加入儀：賽默飛世爾儀器有限公司；LRH一150F型恒溫到酶標(biāo)板中，4℃過夜．抗血清用封閉液稀釋成生化培養(yǎng)箱：上海一恒科技有限公司．1：1600、1：3200、1：6400、1：12800、1：25600、1．3試驗(yàn)方法1：51200，每列一個(gè)稀釋度
