黃芪提取液發(fā)酵枯草芽孢桿菌工藝優(yōu)化研究.pdf

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1、第35卷第7期家畜生態(tài)學(xué)報(bào)Vo1．35NO．72014年7月ActaEcologiaeAnimalisDomasticiJul_2O14黃芪提取液發(fā)酵枯草芽孢桿菌工藝優(yōu)化研究喬宏興，史洪濤，張帥帥，邊傳周¨(1．河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院生物212程系，河南鄭州450046；2．河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南鄭州450O02)[摘要]為研究黃芪提取液發(fā)酵枯草芽孢桿菌的工藝流程，將活化后的枯草芽孢桿菌菌液以1的比例分別接入含黃芪提取液濃度為100、90、8O、70、60、50、40、30的液體培養(yǎng)基中，置于37℃溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，分別取24h、48h、72h的培養(yǎng)物檢測菌液數(shù)量、芽孢形成率和OD值。對(duì)

2、初篩的培養(yǎng)基配方選取接種量、pH、溫度和搖床轉(zhuǎn)速4個(gè)條件進(jìn)行正交試驗(yàn)觀察影響發(fā)酵的主要因素并進(jìn)行發(fā)酵罐大量培養(yǎng)。結(jié)果表明：含6o黃芪提取液芽孢數(shù)量最高可達(dá)1．70×1O。，芽孢形成率99，oD值為2．961。正交試驗(yàn)結(jié)果優(yōu)化條件為接種量10，pH9．0，溫度37℃，轉(zhuǎn)速250r／min，發(fā)酵罐培養(yǎng)結(jié)果48h即可發(fā)酵結(jié)束，芽孢數(shù)量比搖瓶培養(yǎng)高5倍左右。[關(guān)鍵詞]黃芪；枯草芽孢桿菌；發(fā)酵[中圖分類號(hào)]$811．6[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1005—5228(2014)07—0058—05枯草芽孢桿菌是飼料中常用的一種添加劑，具孢桿菌菌種由河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院生物工程系生物技有維持腸道菌群平衡、

3、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、提高生產(chǎn)術(shù)教研室保存；普通培養(yǎng)基按照常規(guī)方法進(jìn)行配性能等作用_1]。黃芪是常用的一種中草藥，味甘、性制_5；20L不銹鋼發(fā)酵罐由鎮(zhèn)江東方生物技術(shù)設(shè)備溫，有補(bǔ)氣升陽、固表止汗、脫毒排膿和生肌等功有限公司生產(chǎn)。效。]，其有效成分黃芪多糖已被證實(shí)具有提高動(dòng)物1．2黃芪提取液制備生產(chǎn)性能，增強(qiáng)機(jī)體免疫力等作用l3]。傳統(tǒng)的合生稱取適量的潔凈黃芪，分別加5倍量、3倍量、2元是簡單的將益生菌與植物多糖組合在一起，雖然倍量水煮沸三次，每次30min，分別取留每次煮沸在臨床中也起到了一定的作用，但是并沒有充分發(fā)濾液，最后合并三次濾液為黃芪提取液。揮出微生物發(fā)酵的巨大潛力。黃芪多糖具有發(fā)

4、酵益1．3菌種的活化生菌的作用，同時(shí)能提高中藥活性成分含量、提高藥將枯草芽孢桿菌甘油凍存管菌種接入液體普通效和降低毒副作用等優(yōu)點(diǎn)¨4]。目前研究大多采用肉湯培養(yǎng)基中，37。C培養(yǎng)24h，以19／6的量接種于固黃芪多糖發(fā)酵益生菌，黃芪中的其他有效活性成分體培養(yǎng)基中，置于37℃培養(yǎng)48h后備用。并未充分發(fā)揮作用，黃芪提取液對(duì)枯草芽孢桿菌發(fā)1．4黃芪發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選酵的研究報(bào)道較少。本研究以補(bǔ)益類中藥黃芪提取以制備的黃芪提取液為主，添加適量液體普通液與枯草芽孢桿菌之間具有生物活性協(xié)同作用為依肉湯、(NH)SO、NaOH設(shè)計(jì)8種發(fā)酵培養(yǎng)基(由據(jù)，進(jìn)行黃芪發(fā)酵枯草芽孢桿菌的生產(chǎn)工藝研究，預(yù)試驗(yàn)得出

5、)，分別命名為1～8號(hào)培養(yǎng)基，黃芪提取(擬解決的關(guān)鍵問題)旨在通過優(yōu)化發(fā)酵工藝，提高微液：液體普通肉湯按(100：0、90：10、8O：20、70：生態(tài)制劑中芽孢的數(shù)量，為大規(guī)模生產(chǎn)降低生產(chǎn)成30、6O：40、50：50、40：60、30：7O)比例混合(V：本，提高制劑的生防效果，為開展獸用中藥的益生菌V)，另加入0．02g(NH4)2SO4、0．04gNaOH，各體外轉(zhuǎn)化技術(shù)、中獸藥的創(chuàng)新提供新技術(shù)和新思路。培養(yǎng)基調(diào)節(jié)pH為9．0。將培養(yǎng)的菌種以1％的量1材料與方法接種于8種發(fā)酵培養(yǎng)基中，37℃轉(zhuǎn)搖培養(yǎng)72h。1．1試驗(yàn)材料與儀器1．5茵體濃度的測定本試驗(yàn)用黃芪購于鄭州市晟吳大藥房；

6、枯草芽菌體濃度的測定使用比濁法進(jìn)行測定，在培養(yǎng)[收稿日期]2014—02—28，修回日期：2014—03—24[基金項(xiàng)目]河南省科技攻關(guān)項(xiàng)目(142102310034)；河南省科技成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目(142201110029)[作者簡介]喬宏興(1976一)，男，河南長垣人，碩士，副教授，研究方向：動(dòng)物營養(yǎng)免疫學(xué)。Email：zzmzqhx@163．tom*[通訊作者]邊傳周(1966一)，男。河南商丘人，教授，碩士，研究方向：動(dòng)物營養(yǎng)免疫學(xué)。E—mail：chuanzhou—bian@126．com第7期喬宏興，等：黃芪提取液發(fā)酵枯草芽孢桿菌工藝優(yōu)化研究59過程中每隔12h分別取樣，用紫外一

7、分光光度測定介紹的方法進(jìn)行芽孢染色，染色后在顯微鏡下觀察OD6值。一個(gè)視野中100個(gè)細(xì)胞中芽孢的數(shù)量，芽孢的形成1．6平板菌落計(jì)數(shù)法的測定率一100x(芽孢的數(shù)量／ioo)。對(duì)1～8號(hào)培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)束后，分別取發(fā)酵液1I．8發(fā)酵條件的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)mL，稀釋至101。、10～、1O倍(由預(yù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)得以培養(yǎng)后枯草芽孢桿菌的數(shù)量為指標(biāo)，選取接出)，取0。1mL的稀釋液涂布于普通瓊脂平板上種量、pH值、溫度和搖床轉(zhuǎn)速4個(gè)條件進(jìn)行正交試(做兩個(gè)