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《H5亞型禽流感病毒LAMP快速檢測方法的建立-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第36卷第2期中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報Vo1．36．No．22014年2月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineFeb．2014doi：10．39698．issn．1008—0589．2014．02．06H5亞型禽流感病毒LAMP快速檢測方法的建立包紅梅，李一經(jīng)，王秀榮，陳化蘭(1．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點實驗室／農(nóng)業(yè)部動物流感重點開放實驗室，黑龍江哈爾濱150001；2．東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030)摘要：為建
2、立快速檢測H5亞型禽流感病毒(AⅣ)的方法，本研究根據(jù)GenBank中登錄的H5亞型AIVHA基因序列，設(shè)計了一套特異識別HA基因序列中6個不同區(qū)段的環(huán)介導(dǎo)恒等溫擴增(LAMP)引物，建立了基于LAMP技術(shù)檢測H5亞型AIV的檢測方法。結(jié)果表明，該方法對H5AIVRNA的最小檢測限為0．1pfu，靈敏度高于普通一步法RT．PCR10倍；擴增反應(yīng)可以在30min內(nèi)完成；在反應(yīng)體系中添加鈣黃綠素(FD)熒光染料后，可以通過肉眼觀察有無熒光直接判定結(jié)果。靈敏性及特異性試驗表明，該方法靈敏度高、特異性好，能夠
3、作為H5亞型A1V的病原學(xué)快速檢測方法。關(guān)鍵詞：禽流感病毒；LAMP方法；H5亞型禽流感病毒中圖分類號：$852．65文獻標識碼：A文章編號：1008．0589(2014)02．0107．04Developmentofaloop—mediatedisothermalamplificationmethodfordetectionofsubtypeH5avianinfluenzavirusBAOHong-mei，LIYiding2，WANGXiu—rong，CHENHua—lan(1．KeyLaborat
4、oryofAnimalInfluenzaoftheMinistryofA鰣cultural，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnologyHarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China；2．CollegeofVeterinaryMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030
5、，China)Abstract：InordertodeveloptherapiddetectionmethodforH5subtypeavianinfluenzavires(AIV)，aloop—mediatedisothermalamplification(LAMP)forthedetectionofH5subtypeA1VwasdevelopedwithasetofspecificprimersweredesignedbasedonthesequencesofH5subtypeAIVhemaggl
6、utinin(HA)geneavailableinGenBank，targetingthe6distinctsequencesofgenes．TheresultsshowedthattheLAMPwasspecifictoamplificationfromH5subtypeA1V，butnotfromothersubtypeA1Vsandotheravianvirus，andthedetectionlimitoftheLAMPmethodwas0．1pfuforH5subtypeAIV，whichwa
7、s100一foldhigherthanthatofroutineone-stepRT-PCR．Theamplificationcouldbecompletedwithin30mininawaterbothatconstanttemperatureof62．5℃．Withtheadditionofafluorescentdye，theresultswereeasiertobeinterpreted．Therefore。thesensitivityandspeciflcityLAMPmethodcould
8、beappliedforepidemiologicalsurveyandclinicaldiagnosisforH5subtypeAIVinfection．Keywords：avianinfluenzavires；loop—mediatedisothermalamplification(LAMP)；H5subtypeavianinfluenzavirus*Correspondingauthor收稿日期：2013．07．12基金項目：中央級公益性科研院所基
