麩曲糖化酶活力測定方法探討-論文.pdf

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1、第27卷第3期四川理工學院學報(自然科學版)VoL27NO．32014年6月JournalofSichuanUniversityofScience＆Engineering(NaturalScienceEdition)Jun．2014文章編號：1673—1549(2014)03-0006-04DOI：10．11863／j．suse．2014．03．02麩曲糖化酶活力測定方法探討羅惠波，王毅，邊名鴻，楊曉東，楊建勤(1．四川理工學院生物工程學院，四川自貢643000；2．釀酒生物技術及應用四川省重點實驗室，四川自貢643000；3．江安縣工業(yè)園區(qū)管理委員會，四川江

2、安644200；4．成都新憶坊商貿有限公司，成都610036)摘要：糖化酶活力是制曲過程中的一個重要指標。建立了3，5一二硝基水楊酸(DNS)結合連續(xù)流動化學分析儀(API)檢測麩曲糖化酶活力的方法。結果表明：通過t檢驗，次碘酸鹽法、DNS法和DNS優(yōu)化法測定糖化酶活力均無顯著性系統(tǒng)誤差，DNS優(yōu)化法的誤差值最低為13．1U／g，RSD值為1．97％。通過F一檢驗雙樣本方差分析，DNS優(yōu)化法較快速滴定法、DNS法測定麩曲糖化酶活力的精密度均有顯著性提高，且具有簡便、快捷的特點。關鍵詞：麩曲；連續(xù)流動化學分析儀(API)；3，5一二硝基水楊酸(DNS)；糖化酶中

3、圖分類號：TQ925文獻標志碼：A糖化酶(Glucoamylase，EC3．2．1．3．)是一種外切型試劑：MgSO、KH2PO4、NaNO、醋酸、醋酸鈉、葡萄糖苷酶，作為白酒微生物代謝過程主要代謝產物之一，糖、3，5一二硝基水楊酸(DNS)等均為分析純，購于成都其活力大小是衡量麩曲質量的重要指標¨引。糖化酶能科龍化工試劑廠。按順序水解淀粉或淀粉類似物非還原端的多種糖苷鍵儀器與設備：uV一2000紫外可見分光光度計(上海而生成葡萄糖，因此被廣泛運用于食品工業(yè)中。常規(guī)尤尼柯有限公司)；連續(xù)流動化學分析儀(Micro—CFA)測定糖化酶活力方法有次碘酸鹽法、Sch

4、oorl法(DU(美國AstoriaPacificInternationa1)；恒溫水浴鍋(北京中法)、快速滴定法和3，5一二硝基水楊酸(DNS)法等，但興偉業(yè)儀器有限公司)；pH計(上海精密科學儀器有限各個測定方法均有一定的缺陷。公司)。本文采用微量連續(xù)流動分析儀對DNS法進行改進，1．2固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)利用導管取樣，運用分光光度計的原理，通過電腦軟件稱取10g的麩皮，加水8％(v／m)，KH：PO0．02g，自動檢測樣品含量，并與次碘酸鹽法、快速滴定法進MgSO40．02g，NNO0．3g，在250mL三角瓶中潤料2h行比較，以期建立檢測麩曲糖化酶活力準確、實

5、用、快后，121cI=滅菌30min，趁熱搖散，冷卻至40℃左右，接速、簡便的新方法，并為麩曲生產的規(guī)范化提供數(shù)據與入0．3％(m／m)麩曲，混合均勻，于溫度30℃、濕度理論支持，更好的指導麩曲生產。95％，培養(yǎng)48h?(22h時進行扣瓶)。1．3粗酶液的制備l材料和方法發(fā)酵結束后，加入4o℃水170mL。然后加入20mL1．1材料與儀器pH4．6的醋酸一醋酸鈉緩沖溶液，攪勻，40℃保溫浸泡材料：麩曲，由釀酒生物技術及應用四川省重點實1h，保溫時每隔10min攪拌1次。用脫脂棉過濾，棄去驗室提供；糖化酶(酶活力100000U／g)，上海藍季科技初濾液，得澄清濾

6、液待用(濾液應盡快分析，若30rain發(fā)展有限公司。內不能使用，應將濾液暫置冰箱中冷藏，分析時升溫至收稿日期：2014-01-03基金項目：釀酒生物技術及應用四川省重點實驗室開放基金項目(NJ2010-05；NJ2011-05；NJ2013-03)作者簡介：羅惠波(1969一)，男，四川自貢人，教授，主要從事酒類發(fā)酵方面的研究，(E-mail)1036884458@qq．corn笙查蘭塑羅惠波等：麩曲糖化酶活力測定方法探討740℃后使用)。驗分析結果見表2。1．4檢測方法表2不同方法測定糖化酶活力分析1．4．1酶活力測定方法次碘酸鹽測定糖化酶活力J。快速滴定法

7、測定糖化酶活力。3，5一二硝基水楊酸法測定糖化酶活力J。1．4．2連續(xù)流動化學分析儀檢測在傳統(tǒng)3，5一二硝基水楊酸(DNS)法的基礎上，結合美國(API)連續(xù)流動化學分析儀，對麩曲糖化酶和標準糖化酶活力進行測定(圖1)。由表2可知，采用不同方法測定糖化酶活力其準確度有較大的差異。通過誤差和均值分析可知，次碘酸鹽的差值最小，說明次碘酸鹽有較高的準確度；而DNS法的差值最大，準確度最低。從RSD值也可以看出，次碘酸鹽法的圖1糖化酶活力測定連接示意圖RSD值為3．6％，較快速滴定法和DNS法準確度高。1．4．3葡萄糖標準曲線測定通過t檢驗，采用次碘酸鹽法和DNS法測

8、定糖化酶濃縮標準液(10L)：稱取1g