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1、氨基酸和生物資源AminoAcidS&BioticreSourceS2001，23（1）：5!8·5·幾株產(chǎn)活性物質(zhì)的海洋細菌的分離與初步鑒定!孫昌魁，劉清海，馬桂榮（山東大學生命科學學院微生物技術(shù)國家重點實驗室，濟南250100）摘要：從海泥、海水及海洋動物中分離到數(shù)十株細菌，對其產(chǎn)生活性物質(zhì)的菌株進一步篩選，得到產(chǎn)蛋白酶、淀粉酶和抑菌活性等生物活性物質(zhì)的幾株海洋細菌，將其中的活性高的四株菌純化后進行菌種鑒定。通過對革蘭氏染色、個體及群體形態(tài)觀察、糖類發(fā)酵、硝酸鹽還原等生理特性的研究，依據(jù)《伯
2、杰氏細菌鑒定手冊》確定它們的分類地位，它們分別應歸屬為歐文氏菌屬（ErwiniaSp.）、氣單孢菌屬（AeromonasSp.）、微球菌屬（（MicrococousSp.）、和假單孢菌屬（（PseudomonasSp.）。關(guān)鍵詞：海洋細菌；生物活性物質(zhì)；分離鑒定中圖分類號：G939.1文獻標識碼：A文章編號：1006-8376（2001）01-0005-04由于海洋環(huán)境十分獨特，包括了高壓、低營株。養(yǎng)、低溫（特別是深海）、無光照以及局部的高1.2菌種篩選溫、高鹽等所謂的生命極限環(huán)境。因此生存在1
3、.2.1具有蛋白酶活性菌株的篩選：用濾紙片這樣極端環(huán)境下的微生物與陸地土壤微生物相法測定。在干酪素平板上無菌放置的濾紙片上比較，它們很可能具有一些不相同的代謝途徑滴一滴待鑒定菌懸液，在30C培養(yǎng)24!361和遺傳背景。顯然這將是生產(chǎn)新型醫(yī)藥品的一后滴加三氯乙酸觀察結(jié)果。個潛在的微生物資源［1］。而且海洋細菌所產(chǎn)1.2.2具有水解淀粉活性菌株的篩選：用濾紙的生物活性物質(zhì)又往往不同于來自陸棲細菌所片法測定。在含定粉的平板上無菌放置的濾紙產(chǎn)生的［2，3，4］。因此，海洋微生物資源的研究與上滴一滴待鑒定
4、菌懸液，在30C培養(yǎng)241后開發(fā)和應用越來越受到世界各國特別是沿海國滴加碘液觀察有無透明圈。家的重視［6，7］。本文報道幾株產(chǎn)活性物質(zhì)的細1.2.3具有抑菌活性菌株的篩選：以大腸桿菌菌的分離與初步鑒定。（E.coli）、金黃色葡萄球菌（S.aureus）、溶壁微球菌（M.iysodikticus）為指示菌用濾紙片1材料和方法法測待鑒定菌的抑菌活性。1.1菌種的分離1.3菌種鑒定主要依據(jù)Bergey"SManualofde-［5］1.1.1富集：將從山東渤海、黃海海域中采集的terminative
5、Bacteriology.海泥或海洋動物消化道內(nèi)容物制成懸液，分別1.3.1形態(tài)觀察：在光學顯微鏡下，用革蘭氏接于用海水配制的細菌、真菌和放線菌等培養(yǎng)染色、鞭毛染色、芽孢染色，觀察菌體形態(tài)，并測基中，在20C、25C、30C下振蕩培養(yǎng)481。菌體大小。用掃描電子顯微鏡進一步確定個體1.1.2分離純化：將富集的菌分別在相應的固形態(tài)和繁殖方式。體培養(yǎng)基平板上反復劃線直至得到純培養(yǎng)的菌1.3.2生理特性測定!收稿日期：2000-09-26作者簡介：孫昌魁（1976—），男，山東大學生命科學學院碩士研究
6、生?！?·孫昌魁，等.幾株產(chǎn)活性物質(zhì)的海洋細菌的分離與初步鑒定1.3.2.1耐鹽試驗：將分離得到的菌株接種于蕊牛奶管中，30C培養(yǎng)24h、3d、5d、7d、9d0%!7.0%的氯化鈉濃度梯度的牛肉膏蛋白胨后觀察記錄石蕊牛奶管的變化情況。液體培養(yǎng)基，30C培養(yǎng)24h，用722型分光光1.2.3.7硝酸鹽還原試驗：將鑒定菌接入硝酸度計測定不同鹽濃度下的培養(yǎng)基濁度，表示生鹽液體管中，30C培養(yǎng)24h，加格里斯氏試劑長情況，確定其對鹽的耐受度和最適鹽度。觀察結(jié)果。1.3.2.2運動性觀察：用半固體穿刺法
7、。培養(yǎng)1.2.3.8糖發(fā)酵試驗：將鑒定菌分別穿刺接種24h觀察結(jié)果。在含葡萄糖（Glucose）、果糖（Fructose）、乳糖1.3.2.3過氧化氫酶測定：取一環(huán)培養(yǎng)24h的（lactose）、麥芽糖（maltose）、木糖（Xylose）、甘露菌苔，涂在干凈的載玻片上，滴一滴3%的雙氧醇（Mannitol）培養(yǎng)基中，30C培養(yǎng)1d、2d、3d、水（H202）觀察結(jié)果。4d、5d、6d、7d觀察結(jié)果。1.3.2.4明膠液化試驗：將待測菌穿刺接種到明膠培養(yǎng)基中，30C培養(yǎng)24h，放入冰箱待對2結(jié)
8、果與討論照管凝固后觀察結(jié)果。2.1篩選結(jié)果1.2.3.5硫化氫產(chǎn)生試驗：用醋酸鉛試紙條2.1.1產(chǎn)酶菌株的篩選：在干酪素平板上，產(chǎn)生法。鑒定菌培養(yǎng)24h、3d、7d后分別觀察試紙明顯的水解圈者表示有蛋白酶活性，在淀粉平條的顏色是否變黑。板上，產(chǎn)生明顯的水解圈者表示有淀粉酶活性，1.2.3.6石蕊牛奶試驗：將鑒定菌分別接到石結(jié)果如表1。表1產(chǎn)蛋白酶和淀粉酶的菌株篩選結(jié)果菌株A-214-25-237-11"#Y-1蛋白酶活性+++++++++---淀粉酶活性--+++----從表1中可見，4-2、7
