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《Caspase-3在牛膝多糖誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞BEL-7402凋亡中的作用-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、2014年第3期牡丹江師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)NO．3。2014(總第88期)JournalofMudanjiangNormalUniversityTotalNo．88Caspase-3在牛膝多糖誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞BEL-7402凋亡中的作用宗燦華，郭新民，韓翠萍，王桂云，初彥輝，田麗梅，宋高臣，包?；?，張淑芹(1．牡丹江醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室，黑龍江牡丹江157011；2．哈爾濱醫(yī)科大學(xué)大慶校區(qū)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系，黑龍江大慶163319)摘要：為研究牛膝多糖對(duì)肝癌BEL一7402細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白Caspase-3表達(dá)的作用，采用不同濃度ABPS作用于肝癌BEL一74
2、02細(xì)胞48h，MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長抑制率，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，WesternBlot檢測(cè)Caspase-3蛋白表達(dá)．實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，ABPS對(duì)BEL一7402細(xì)胞具有生長抑制作用，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，作用機(jī)制可能與上調(diào)Caspase-3蛋白表達(dá)有關(guān)．關(guān)鍵詞：牛膝多糖；人肝癌BEL一7402細(xì)胞；細(xì)胞凋亡；Caspase-3蛋白[中圖分類號(hào)]G804．2[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A[文章編號(hào)31003—6180(2014)03—0031—02牛膝為莧科植物牛膝(Achyranthesbidenta—每孔加人2OL5．0g／L的MTT溶液繼續(xù)培養(yǎng)taB1)干燥的根，《植物名圖實(shí)考》
3、記載，牛膝“以4h，吸凈培養(yǎng)液后，每孔加入150L二甲基亞砜產(chǎn)懷慶、四川I者入湯劑”．牛膝多糖(Achyranthes(DMSO)，完全顯色后，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀測(cè)550bidentatapolysaccharides，ABPS)為牛膝的主要am吸光度值，計(jì)算抑制率：抑制率一(1一實(shí)驗(yàn)組成分之一，具有顯著抗腫瘤作用口]，但其抗腫瘤吸光度／對(duì)照組吸光度)×100．機(jī)制尚不十分清楚．本實(shí)驗(yàn)研究牛膝多糖對(duì)肝癌1．2．2細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察BEL一7402細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白Caspase一3表每孔1×10個(gè)／mL細(xì)胞密度接種于96孔達(dá)的作用，從分子水平對(duì)牛膝多糖抗腫瘤機(jī)制進(jìn)板中，待細(xì)
4、胞貼壁生長后，加入不同濃度ABPS行研究．處理48h，棄培養(yǎng)液，4多聚甲醛4℃固定15min，PBS洗3次，Hoechst33258染色液1材料與方法(10btg／mL)避光染色10rain．熒光顯微鏡觀察1．1材料細(xì)胞形態(tài)變化．BEL一7402細(xì)胞，中國科學(xué)院上海細(xì)胞生物1．2．3WesternBlot檢測(cè)Caspase-3蛋白表達(dá)學(xué)研究所；ABPS，牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗大藥房；RP—分別提取各組細(xì)胞總蛋白質(zhì)，選擇5的濃MI1640培養(yǎng)基，美國GIBCo公司；四甲基偶氮縮膠和12的分離膠進(jìn)行SDS—PAGE分析，唑藍(lán)(MTT)，美國SIGMA公司；Caspase一3抗電
5、泳結(jié)束后將凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素體與辣根過氧化物酶結(jié)合的兔抗小鼠IgG，購自膜上，室溫脫脂牛奶封閉1h，一抗4℃孵育過SantaCruzBiotechno1ogy．夜．取出后TBST洗3次，再用二抗37℃搖床孵1．2方法育1h．TBST洗3次，發(fā)光液中顯色，在暗室中曝光、顯影．使用BandScand5．0軟件對(duì)圖像進(jìn)行1．2．1生長抑制率測(cè)定灰度掃描，記錄灰度值．Caspase-3蛋白表達(dá)水BEL一7402細(xì)胞用含10小牛血清的RP—平以相對(duì)表達(dá)量即Caspase-3／B—Actin灰度的MI1640培養(yǎng)液于37℃，5CO2濃度培養(yǎng)箱中比值計(jì)算．培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長
6、期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)．調(diào)整細(xì)胞濃度至1×10個(gè)／mL，接種于96孑L培養(yǎng)板中，每孔1．3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理100L_細(xì)胞貼壁生長后，棄去培養(yǎng)液，分別加入實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)均用±S表示，采用100L不同濃度的ABPS(100，200，400g／SPSS16．0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理．分mL)為實(shí)驗(yàn)組，空白對(duì)照組加入等體積培養(yǎng)液，每析方法采用單因素方差分析，以PO．O5為顯著種濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孑L．將平板置于培養(yǎng)箱孵育48h，性差異．收稿日期：2013—03—20基金項(xiàng)目：黑龍江省衛(wèi)生廳科研項(xiàng)目(2007—009)；黑龍江省教育廳科研項(xiàng)目(11533078)·31·
