TLR4在肝癌患者外周血單核細(xì)胞中的表達(dá)及意義-論文.pdf

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1、第36卷2期寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)2014年2月JournalofNingxiaMedicalUniversity·161·文章編號(hào)：1674—6309(2014)02—0161—03·論著·TLR4在肝癌患者外周血單核細(xì)胞中的表達(dá)及意義張艷婷。．一，楊少奇，孟磊，姚文暾，黃睿(1．寧夏醫(yī)科大學(xué)，銀川750004；2．寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，銀川750004；3．蘭州大學(xué)第一醫(yī)院，蘭州730000)摘要：目的研究肝癌患者外周血單核細(xì)胞TLR4的表達(dá)情況及意義。方法采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)50例肝癌患者和30例健康正常

2、人外周血單核細(xì)胞表面TLR4的表達(dá)，采用ELISA法檢測(cè)肝癌組及對(duì)照組血漿NF—KB、IL一6的表達(dá)。結(jié)果肝癌患者外周血TLR4、NF—KB、IL一6表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組(P<0．01)；肝癌患者TLR4的表達(dá)與NF—KB呈正相關(guān)(r=0．352,P

3、L加人EDTA抗凝管中，取1mL流式細(xì)胞然免疫受體，為一種I型跨膜蛋白，主要表達(dá)于外術(shù)備用，其余4mL經(jīng)2000r·min離心10min后周血單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞提取血漿，一80℃凍存?zhèn)溆?。表面，可識(shí)別病原相關(guān)分子模式發(fā)揮天然免疫作1．3主要試劑和儀器PE標(biāo)記人TLR4抗體用。研究發(fā)現(xiàn)TLR4信號(hào)通路的激活可引發(fā)一系(美國eBioscience)，紅細(xì)胞裂解液(美國BD公列免疫炎癥反應(yīng)，與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。目前司)，IL一6ELISA試劑盒(欣博盛公司)，NF—KB關(guān)于TLR4與

4、肝癌關(guān)系的研究多采用動(dòng)物模型和EHSA試劑盒(美國Cusabio)；細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法，本研究檢測(cè)肝癌患者外周血單核流式細(xì)胞儀(美國BD公司)，H2500R一2低細(xì)胞上TLR4及血漿NF—KB、IL一6因子的表達(dá)溫高速離心機(jī)(上海新諾儀器)，酶標(biāo)儀(Bio—情況，研究TLR4與肝癌發(fā)生的關(guān)系。RAD680美國)，HF212型生化培養(yǎng)箱(上海力中l(wèi)材料與方法科學(xué)儀器)。1．1研究對(duì)象寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院2012年21．4實(shí)驗(yàn)方法采用流式細(xì)胞術(shù)分離單核細(xì)胞月一6月確診為原發(fā)性肝癌的住院患者50例，其并檢測(cè)其表面r

5、rLR4的表達(dá)，每份血樣標(biāo)記2只中男39例，女11例，年齡33—73歲，平均試管，一只試管內(nèi)加入PE—TLR4抗體5／xL，另一(54．94-10．32)歲，均符合《中國肝癌診斷治療指只加入5tzLPBS液做為空白對(duì)照，兩只試管均加南》(2009版)診斷標(biāo)準(zhǔn)，50例肝癌患者乙肝表面入1001xL血樣振蕩搖勻，4℃靜置20min后加入抗原均陽性。同期隨機(jī)選擇30名來我院健康體紅細(xì)胞裂解液，振蕩搖勻，室溫避光靜置15min。檢者設(shè)為健康對(duì)照組，年齡40～74歲，其中男201800r·min離心5min棄上

6、清，加入PBS液例，女1O例，平均(51。734-7．83)歲，既往無肝臟2mL洗滌，1800r·min離心5rain棄上清，加入病史，乙肝表面抗原均陰性，血尿常規(guī)及生化指標(biāo)PBS液3001~L，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)單核細(xì)胞，rLR4檢測(cè)結(jié)果均正常，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組年齡、性別無統(tǒng)陽性細(xì)胞率。計(jì)學(xué)差異。采用EUSA法檢測(cè)血漿中IL一6、NF—KB因1．2標(biāo)本來源8O例研究對(duì)象清晨空腹采集外子，嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒說明書操作，最后用酶標(biāo)儀檢測(cè)OD值，應(yīng)用CurveExpertI．3軟件制作相收稿日期：2013—0

7、9—12應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將測(cè)得的OD值換算為所測(cè)因子基金項(xiàng)目：2011年寧夏科技攻關(guān)項(xiàng)目；2013年寧夏科技計(jì)劃項(xiàng)目濃度。作者簡(jiǎn)介：張艷婷(1988一)，女，在讀碩士研究生，研究方向：肝臟1．5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17．0統(tǒng)計(jì)軟件分疾病。通信作者：楊少奇，教授，碩士研究生導(dǎo)師，博士。析。計(jì)量資料采用(元4-s)表示，采用t檢驗(yàn)，兩變E—mail：shaoqiynh@hotmail．corn量關(guān)聯(lián)性分析采用Pearson相關(guān)性分析，P≤0．05·l62·寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)36卷為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究結(jié)果

8、顯示，肝癌患者外周血單核細(xì)胞2結(jié)果TLR4表達(dá)較健康人明顯增高，這與TLR4在肝癌2．1外周血單核細(xì)胞TLR4陽性細(xì)胞率及血漿組織中的表達(dá)顯著增高的研究結(jié)果一致【7]，提示中NF—zB、IL一6的表達(dá)情況經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，TLR4可能與肝癌的發(fā)生密切相關(guān)；肝癌患者血漿肝癌患者外周血單核細(xì)胞上TLR4表達(dá)顯著高于中NF—KB和IL一6的表達(dá)水平較正常人亦明顯健康對(duì)照組(P<0．01)；肝癌患者血漿NF—zB、增高，且隨著肝癌患者外周血單核細(xì)胞上TLR4IL一6