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《α-半乳糖苷酶法合成α-半乳糖基-β-環(huán)糊精的研究.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、α-半乳糖苷酶法合成α-半乳糖基-β-環(huán)糊精的研究 摘要：應(yīng)用發(fā)芽咖啡豆α－半乳糖苷酶法合成α－半乳糖基－β－環(huán)糊精，研究其合成工藝。通過(guò)Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ設(shè)計(jì)等方法，得出工藝條件為α－半乳糖苷酶用量７３ｎｋａｔ，時(shí)間２８ｈ，ｐＨ６．３，溫度４０℃，振蕩速度７５ｒ／ｍｉｎ，反應(yīng)體系包括２ｍＬ醋酸緩沖液，β－環(huán)糊精０．４ｍｏｌ／Ｌ，蜜二糖０．８ｍｏｌ／Ｌ。在此條件下，α－半乳糖基－β－環(huán)糊精絕對(duì)產(chǎn)率為２８．４％，比優(yōu)化前提高了４１．３％?！ ￡P(guān)鍵詞：α－半乳糖苷酶；酶法合成；α－半乳糖基－β－環(huán)
2、糊精； 中圖分類號(hào)：ＴＳ２７３文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８11419－4041-03 ?。牛睿恚幔簦椋悖樱睿簦瑁澹螅椋螅铮姒粒牵幔欤幔悖簦铮螅欤拢悖悖欤铮洌澹簦颍椋睿猓粒纾幔欤幔悖簦铮螅椋洌幔螅濉 。樱龋牛危祝幔睿纾幔睿纾?，ＪＩＮＺｈｅｎｇ－ｙｕ２，ＧＡＯＨｏｎｇ３ ?。粒猓螅簦颍幔悖簦海校幔颍幔恚澹簦澹颍螅幔妫妫澹悖簦椋睿纾簦瑁澹螅睿簦瑁澹螅椋螅铮姒粒纾幔欤幔悖簦铮螅欤拢悖悖欤铮洌澹簦颍椋睿猓粒纾幔欤幔悖簦铮螅椋洌幔螅澹铮妫纾澹?/p>
3、ｍｉｎａｔｉｎｇｃｏｆｆｅｅｂｅａｎｓｗｅｒｅｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙｓｔｕｄｉｅｄｂｙＢｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎｄｅｓｉｇｎ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ，ｅｎｚｙｍｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，７３ｎｋａｔ；Rｅａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ，２８ｈ；ｐＨ，６．３；Rｅａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，４０℃；Oｓｃｉｌｌａｔｏｒｙｓｐｅｅｄ，７５ｒ／ｍｉｎ；β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ，０．４ｍｏｌ／Ｌ；ｍｅｌｉｂｉｏｓｅ，０．８ｍｏｌ／Ｌ；ａｎｄａｃｅｔａｔ
4、ｅｂｕｆｆｅｒ，２ｍＬ，Ｔｈｅｙｉｅｌｄｏｆα－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌ－β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｗａｓ２８．４％ｕｎｄｅｒｔｈｅｓｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｗｈｉｃｈｗａｓ４１．３％ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓbeforeoptimization． ?。耍澹鳎铮颍洌螅害粒纾幔欤幔悖簦铮螅椋洌幔螅澹唬澹睿恚幔簦椋悖螅睿簦瑁澹螅椋?；α－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌ－β－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ 環(huán)糊精具有內(nèi)疏水、外親水的特殊性質(zhì)，在制藥、化工、食品等領(lǐng)域被廣泛地研究及應(yīng)用。但其溶解性
5、能不佳，制約了進(jìn)一步的應(yīng)用研究。改性制備分支環(huán)糊精，可以擴(kuò)大分子親水區(qū)域，提高溶解性［１－４］。α－半乳糖基－β－環(huán)糊精是一種分支環(huán)糊精，是β－環(huán)糊精的衍生物，其具有較高的水溶性，分支上的半乳糖基在動(dòng)物組織中具有特殊的識(shí)別受體，具有廣闊的應(yīng)用前景［５－７］。前期研究工作采用江南大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自制的發(fā)芽咖啡豆α－半乳糖苷酶酶法合成得到α－半乳糖基－β－環(huán)糊精，并成功地鑒定了其結(jié)構(gòu)。本實(shí)驗(yàn)以β－環(huán)糊精和蜜二糖為原料，優(yōu)化發(fā)芽咖啡豆α－半乳糖苷酶法合成α－半乳糖基－β－環(huán)糊精的工藝，有利
6、于提高酶法合成的產(chǎn)量和效率，進(jìn)而指導(dǎo)生產(chǎn)?！ 。辈牧吓c方法 ?。保辈牧稀 。保保痹噭┌l(fā)芽咖啡豆α－半乳糖苷酶為江南大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自制［８］；對(duì)硝基苯酚－α－半乳糖苷和蜜二糖購(gòu)于Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ貿(mào)易有限公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?！ 。保保矁x器與設(shè)備Ｗａｔｅｒｓ６００高效液相色譜儀，美國(guó)Ｗａｔｅｒｓ公司；Ｄｉｒｅｃｔ－Ｑ３超純水系統(tǒng)，美國(guó)Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司；Ｄｅｌｔａ３２０ｐＨ計(jì)，梅特勒－托利多儀器有限公司；ＸＷ－８０Ａ漩渦混合器，上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠；８０－
7、２離心機(jī)，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司；ＨＷ．ＹＳ電子恒溫水浴鍋，浙江舟山海源儀器廠?！ 。保卜椒ā 。保玻泵阜ê铣煞磻?yīng)將β－環(huán)糊精、蜜二糖和發(fā)芽咖啡豆α－半乳糖苷酶溶解于２ｍＬ醋酸緩沖液中，使反應(yīng)緩沖液中包括β－環(huán)糊精０．４ｍｏｌ／Ｌ、蜜二糖０．８ｍｏｌ／Ｌ、α－半乳糖苷酶５０ｎｋａｔ。由于水溶性較差，混合體系中的β－環(huán)糊精不能完全溶解，呈現(xiàn)過(guò)飽和狀態(tài)，將盛有反應(yīng)緩沖液的容器置于恒溫振蕩器中，進(jìn)行酶法合成反應(yīng)，反應(yīng)條件為３０℃，１００ｒ／ｍｉｎ反應(yīng)３６ｈ。反應(yīng)結(jié)束后煮沸１０ｍｉｎ，使α－
8、半乳糖苷酶充分滅活。滅活后的混合液５０００ｒ／ｍｉｎ離心５ｍｉｎ，取上清液［８，９］?！ 。保?．２α－半乳糖基－β－環(huán)糊精的高效液相色譜分析及制備①高效液相色譜分析酶法合成反應(yīng)后的上清液。泵，Ｗａｔｅｒｓ６００；色譜柱，ＨｙｐｅｒｓｉｌＡｓｐ－１－ＮＨ２柱；流動(dòng)相，７５％乙腈；檢測(cè)器，Ｗａｔｅｒｓ２４１０差示折光檢測(cè)器；柱溫，３０℃；流速，１.0ｍＬ／ｍｉｎ；進(jìn)樣量，２０μＬ。②采用制備型高效液相色譜對(duì)上清液進(jìn)行分離純化，對(duì)應(yīng)特征吸收峰收集各組分，得到所需產(chǎn)品。泵，
